Участие гена TGFB1 в формировании предрасположенности к инфаркту миокарда

Полный текст

ВВЕДЕНИЕ. Абсолютное большинство сердечно-сосудистых заболеваний (ССЗ) представляет собой комплексные полигенные заболевания. К настоящему времени выявлено множество генетических маркеров ССЗ, среди которых особое место занимают гены, кодирующие белки, вовлеченные в атеросклеротический процесс. Это справедливо и для ишемической болезни сердца (ИБС), одной из форм которой является инфаркт миокарда (ИМ). Среди этих маркеров можно выделить ген TGFB1, продукт которого - трансформирующий фактор роста бета 1, входит в суперсемейство цитокинов TGF-β и выполняет как проатерогенную, так и антиатерогенную функцию. Особый интерес представляют три однонуклеотидных полиморфизма (SNP) этого гена: rs1800469 (SNP —509C>T) в про-моторной области, rs1982073 (SNP 869T>C, Leu10Pro) и rs1800471 (SNP 915G>C, Arg25Pro) в сигнальной последовательности (экзон 1) [1]. Все исследованные полиморфизмы влияют на уровень продукции TGF-ß1; по данным [2-4], аллель T SNP —509C>T, аллель Т SNP 869T>C и генотип G/G SNP 915G>C связаны с более высоким уровнем белка в плазме крови. Анализу ассоциаций названных полиморфных участков с развитием ИБС и ИМ посвящен ряд работ, в одних из которых ассоциации были выявлены [1, 5, 6], а в других - нет. Поскольку, как это было окончательно доказано в последние годы, генетическая предрасположенность ко многим полигенным заболеваниям отличается в различных этнических группах, исследования необходимо проводить в этнически гомогенных популяциях. У этнических русских ассоциации SNP 869T>C и 915G>C гена TGFB1 с развитием ИМ и других ССЗ не исследовали. Ранее на относительно небольших выборках мы наблюдали позитивную ассоциацию аллеля TGFB1*-509T с развитием ИМ в составе сочетаний с аллелями/генотипами других генов системы воспаления, а также участие «альтернативного аллеля» -509*С в протективных сочетаниях [7]. В настоящей работе на выборке более чем из 400 русских больных проведен поиск ассоциации полиморфизмов rs1800469 (SNP -509C>T), rs1982073 (SNP 869T>C, Leu10Pro) и rs1800471 (SNP 915G>C, Arg25Pro) гена TGFB1 с развитием ИМ, а также анализ их гаплотипов у здоровых индивидов. Анализировали распределение аллелей и генотипов данных полиморфных участков, сравнивая разные возрастные группы больных и здоровых, а также группы больных, перенесших первый и повторный(е) ИМ. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ Для исследования методом «случай-контроль» использовали образцы из коллекции крови и геномной ДНК 406 больных ИМ, русских по этнической принадлежности, средний возраст(ср. возраст) ± стандартное отклонение (SD) - 57.5 ± 12.8 лет. Из них 272 мужчины (ср. возраст - 53.4 ± 11.9 лет) и 134 женщины (ср. возраст - 65.6 ± 10.3 лет). Контрольная группа состояла из 198 лиц, русских, без ССЗ в анамнезе, ср. возраст - 59.8 ± 13.3 лет. Из них 112 мужчин (ср. возраст - 57.1 ± 11.9 лет) и 86 женщин (ср. возраст - 63.2 ± 14.2 лет). Диагноз ИМ ставили на основании критериев AHA/ESC 2001 г. Лица контрольной группы прохо дили обследование для исключения ИБС. От всех больных или их родственников, а также индивидов контрольной группы получено информированное согласие на проведение исследования. ДНК выделяли из периферической крови с помощью модифицированного метода с использованием экстракции смесью фенол-хлороформ [8]. Полиморфные участки гена TGFB1 анализировали методом ПЦР-SSP. Фрагмент ДНК длиной 283 п.н., содержащий SNP 869T>C, амплифицировали с использованием аллель-специфических праймеров: 5'-AGCAGCGGTAGCAGCAGCA-3' (SSP T), 5'-GCAGCGGTAGCAGCAGCG-3' (SSP C) и общего праймера 5'-CTACCTTTTGCCGGGAGACC-3'. В случае SNP 915G>C амплифицировали фрагмент ДНК длиной 125 п.н. с использованием аллель-специфических праймеров: 5'-TGGTGCTGACGCCTGGCCG-3' (SSP G), 5'-TGGTGCTGACGCCTGGCCC-3' (SSP C) и общего праймера 5'-GGCGAGCCGCAGCTTGGACA-3'. Все праймеры сконструированы с помощью пакетов программ Vector NTI 7.1 и Primo [9]. Амплификационная смесь (10 мкл) содержала 70 мМ Tрис-HCl (pH 9.0), 20 мМ (NH4)2SO4, 1.0 мМ MgCl2, 0.025% Tвин-20, 0.025% NP-40, по 5 пмоль каждого праймера, 0.2 мМ dNTP, 0.5 ед. Taq-полимеразы и 100-200 нг ДНК, минеральное масло. Программа амплификации: 95°С, 5 мин. Затем 10 циклов: 95°С - 1 мин, 64°С - 1 мин, 72°С - 1 мин; и 20 циклов: 95°С - 30 с, 58°С - 50 с, 72°С - 50 с. ПЦР проводили в амплификаторе МС16 (ООО «ДНК-технология», Россия). Присутствие продуктов амплификации проверяли электрофорезом в 2% агарозном геле в присутствии бромида этидия. SNP -509C>T анализировали как описано в [7]. Статистический анализ Анализ отклонения наблюдаемых частот генотипов от равновесия Харди-Вайнберга и неравновесия по сцеплению (LD) проводили с использованием свободно распространяемой программы Haploview 4.0 [10]. Частоты носительства аллелей и генотипов отдельных SNP в различных группах сравнивали с помощью точного двустороннего критерия Фишера с использованием онлайн-версии программы GraphPad Instat [11]. Для выявления значимой связи с ИМ носительства сочетаний аллелей/генотипов исследуемых полиморфных участков гена TGFB1 применяли программное обеспечение APSampler [12, 13], оценивая значимость ассоциации каждого найденного основным алгоритмом сочетания по значению точного одностороннего критерия Фишера. Значимым считали различие сравниваемых частот при p < 0.05. ТОМ 4 № 2 (13) 2012 | ACTA NATURAE | 77 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ СТАТЬИ Ассоциация инфаркта миокарда с носительством сочетаний аллелей/генотипов трех SNP гена TGFB1 SNP гена TGFB1* Носители (%)/неносители (%) сочетания Значение p при сравнении частот** ОШ (95% ДИ) для значимых различий -509C>T 869T>C 915G>C Пациенты (N = 397) Контрольная группа (N = 198) Предрасполагающие сочетания T T/T G 116 (29.2)/281 (70.8) 33 (16.7)/165 (83.3) 0.00048 2.06 (1.34-3.18) T T/T - 116 (29.2)/281 (70.8) 33 (16.7)/165 (83.3) 0.00048 2.06 (1.34-3.18) - T/T G 181 (45.6)/216 (54.4) 64 (32.3)/134 (67.7) 0.0012 1.75 (1.23-2.51) T - G 273 (67.2)/ 133 (32.8) 116 (58.6)/ 82 (41.4) 0.023 1.45 (1.02-2.06) Протективные сочетания C C C 17 (4.3)/380 (95.7) 23 (11.6)/175 (88.4) 0.00097 0.34 (0.18-0.65) - C C 20 (5.0)/377 (95.0) 23 (11.6)/175 (88.4) 0.0036 0.40 (0.22-0.75) C - C 31 (7.8)/375 (92.2) 29 (14.6)/169 (85.4) 0.0061 0.48 (0.28-0.83) C C - 190 (47.9)/207 (52.1) 117 (59.1)/81 (40.9) 0.0062 0.64 (0.45-0.90) *Для каждого из трех SNP аллель (генотип) риска показан на более темном цветном фоне, чем протективный аллель. **Представлены в порядке убывания уровня значимости для предрасполагающих и протективных сочетаний по отдельности. Оценивая отношения шансов (ОШ) и их 95% доверительный интервал (ДИ), исключали из числа статистически значимых ассоциаций те, для которых ДИ пересекал 1. РЕЗУЛЬТАТЫ Проведено геномное типирование полиморфных участков -509C>T, 869T>C и 915G>C гена TGFB1 у больных ИМ и индивидов без ССЗ в анамнезе (все русские по этнической принадлежности) с последующим анализом возможной ассоциации этих полиморфизмов с развитием ИМ. Не наблюдали отклонений в распределении аллелей и генотипов этих полиморфизмов от равновесия Харди-Вайнберга в контрольной группе. В группе больных равновесие Харди-Вайнберга соблюдалось для SNP 869T>C и 915G>C, но не для -509C>T (p = 0.0007). Частоты носительства аллелей и генотипов гена TGFB1 у пациентов с ИМ и в контрольной группе приведены на рис. 1. Среди больных значимо чаще, чем в контрольной группе, встречались носители ал- леля TGFB1*-509T (в составе генотипов Т/Т и С/Т) (p = 0.046, ОШ = 1.45, 95% ДИ: 1.02-2.06) и реже -генотипа TGFB1*-509C/C (p = 0.046, ОШ = 0.69, 95% ДИ: 0.49-0.98). Кроме того, у них чаще встречались генотипы TGFB1*869T/T (p = 0.0024, ОШ = 1.75, 95% ДИ: 1.22-2.51) и TGFB1*915G/G (p = 0.048, ОШ = 1.76, 95% ДИ: 1.05-2.97). Соответственно в контрольной группе было больше носителей аллелей TGFB1*869C (сумма генотипов С/С и С/Т) (p = 0.0024, ОШ = 0.57, 95% ДИ: 0.40-0.81) и TGFB1*915C (сумма генотипов С/С и G/C) (p = 0.048, ОШ = 0.57, 95% ДИ: 0.34-0.96). Таким образом, носительство аллеля TGFB1*-509T, или генотипа TGFB1*869T/T, или генотипа TGFB1*915G/G может рассматриваться как фактор риска развития ИМ. При этом ассоциация с ИМ но-сительства генотипа TGFB1*869T/T в 20 раз более значима, чем с остальными маркерами. В связи с тем, что все исследуемые полиморфизмы находятся в одном гене, и учитывая опубликованные данные о неравновесном сцеплении полиморфных участков в этой области [14-16], мы проанализи- 78 | ACTA NATURAE | ТОМ 4 № 2 (13) 2012 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ СТАТЬИ ровали возможные гаплотипы этих SNP. Мы ограничились контрольной группой, поскольку в ней уравнение Харди-Вайнберга соблюдалось во всех исследованных полиморфных участках. Расчет попарного неравновесия по сцеплению между SNP -509C>T, SNP 915G>C и 869T>C, выполненный с помощью программы Haploview 4.0 [10], выявил слабое сцепление (г2 < 0.05 для всех пар). Вероятно, ассоциации ИМ с носительством аллелей этих SNP можно рассматривать как независящие друг от друга. Это дало основание проанализировать ассоциацию совместного носительства аллелей/генотипов этих полиморфизмов с развитием ИМ, используя результаты подсчетов с помощью программного обеспечения APSampler (таблица). Как видно из данных таблицы, совместное носительство аллеля TGFB1*-509T и генотипа TGFB1*869T/T, каждый из которых является фактором риска развития ИМ (см. рис. 1А,Б), приводит к возрастанию как уровня значимости ассоциации с ИМ (p = 0.00048), так и значения ОШ (равно 2.06), по сравнению с носительством каждого из них. Добавление к этому биаллельному сочетанию аллеля TGFB1*915G, носительство которого в отдельности не ассоциировано с ИМ (см. рис. 1В), сохраняет неизменными значения р и ОШ, поскольку все носители сочетания (TGFB1*-509T + TGFB1*869T/T) несли также аллель TGFB1*915G. Носительство двух других биал-лельных сочетаний (TGFB1*869T/T + TGFB1*915G) и (TGFB1*-509T + TGFB1*915G) характеризуется меньшими уровнями значимости (p = 0.0012 и 0.023 соответственно) и значений ОШ (1.75 и 1.45 соответственно), чем сочетание (TGFB1*-509T + TGFB1*869T/T). Совместное носительство аллелей TGFB1*-509C, TGFB1*869C и TGFB1*915C также высокозначимо, но негативно ассоциировано с ИМ (таблица). Поодиночке негативная ассоциация с ИМ показана для двух последних аллелей, но не для TGFB1*-509C (см. рис. 1). В этом случае уровень значимости и отличие величины ОШ от 1 для трехаллельного сочетания (p = 0.00097, ОШ = 0.34) больше, чем для всех трех входящих в его состав биаллельных сочетаний (p от 0.0036 до 0.0062; ОШ от 0.40 до 0.64). При этом аллели/генотипы трех SNP, входящие в протективное сочетание, являются альтернативными по отношению к аллелям, входящим в предрасполагающее сочетание. Известно, что факторы генетического риска часто более значимы для развития ИМ у более молодых индивидов (при раннем ИМ). Исходя из этого, проанализировали распределение частот аллелей/генотипов полиморфных участков в различных возрастных подгруппах больных ИМ. При выделении подгруппы лиц, у которых ИМ развился до 50 лет А 0 1 ''S 0 1 ''S о4 100 90 80 70 60 К 50 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 я Пациенты с ИМ • Контрольная группа CC CT TT C (CC+CT) T (TT+CT) * Пациенты с ИМ • Контрольная группа TT ' Ct ' CC T (TT+CT) c (CC+CT) Пациенты с ИМ Контрольная группа GG GC CC G (GG+GC) C (CC+GC) Рис. 1. Частоты носительства аллелей и генотипов полиморфных участков гена TGFB1 у пациентов с ИМ и индивидов контрольной группы. А - SNP -509C>T. * p = 0.046, ОШ = 0.69; ** p = 0.046, ОШ = 1.45. Б - SNP 869T>C. * p = 0.0024, ОШ = 1.75; ** p = 0.0024, ОШ = 0.57. В - SNP 915G>C. * p = 0.048, ОШ = 1.76; ОШ = 0.57. p = 0.048, включительно (121 человек), и сравнении их с общей контрольной группой наблюдали различия, сходные с различиями в общей выборке. Так, в группе пациентов моложе 50 лет чаще встречались носители аллеля TGFB1*-509T (p = 0.002, ОШ = 2.24, 95% ДИ: 1.35-3.71) и генотипа TGFB1*869T/T (p = 0.008, ОШ = 1.93, 95% ДИ: 1.18-3.15), а в контрольной группе - носители генотипа TGFB1*-509C/C (p = 0.002, ОШ = 0.45, 95% ДИ: 0.27-0.74) и аллеля TGFB1*869C (p = 0.008, ОШ = 0.52, 95% ДИ: 0.32-0.85). Кроме того, Б В ТОМ 4 № 2 (13) 2012 | ACTA NATURAE | 79 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ СТАТЬИ при комплексном анализе было выявлено ассоциированное с ранним ИМ сочетание носительства аллеля TGFB1*-509T и генотипа TGFB1*869T/T (p = 0.00015, ОШ = 2.73, 95% ДИ: 1.60-4.63), аналогичное полученному в общей группе. Далее мы разделили группу больных на подгруппы с одним ИМ (73 человека) и с повторным(и) ИМ (226 человек) и сравнили их генотипы между собой. Выявили ассоциацию только одного SNP: генотип TGFB1*-509T/T чаще встречался у больных с повторными ИМ, чем у перенесших один ИМ (p = 0.0078, ОШ = 2.60, 95% ДИ: 1.28-5.28), в то время как аллель TGFB1*-509C был протективным (p = 0.016, ОШ = 0.38, 95% ДИ: 0.19-0.78). Обнаруженные комплексным анализом сочетания оказались менее значимыми, чем одиночная ассоциация SNP -509C>T. ОБСУЖДЕНИЕ В этой работе представлены данные о распределении аллелей и генотипов трех функционально значимых полиморфных участков гена TGFB1 в популяционной выборке индивидов русской этнической принадлежности (контрольная группа). Мы смогли найти опубликованные данные о частоте аллелей/генотипов только одного из исследованных нами SNP у русских, а именно 869T>C, причем в группе мужчин [17]. Полученные в этом исследовании частоты генотипов близки к частотам, определенным в нашей работе (рис. 2Б). На рис. 2 представлены сведения не только для русских, но и опубликованные данные о распределении генотипов SNP -509C>T, SNP 869T>C и SNP 915G>C гена TGFB1 в различных популяциях европеоидов. В целом, наблюдавшиеся нами у русских частоты генотипов укладываются в довольно широкий диапазон частот, описанных для различных популяций Европы. При этом картина различается для отдельных SNP: если по полиморфизму 915G>C наблюдается полное единообразие распределения генотипов во всех исследованных популяциях европеоидов (рис. 2В), то в случае SNP -509C>T и SNP 869T>C этнические различия достигают уровня значимости при сравнении частот генотипов -509Т/Т у русских и итальянцев (р = 0.001) (рис. 2А). Эти данные могут отражать различия в характере сцепления полиморфизмов гена TGFB1 в разных популяциях. Хотя во многих работах у европеоидов выявляли различные гаплотипы, содержащие исследуемые полиморфизмы гена TGFB1, мы не получили подобных данных для русских. Вероятно, это связано с популяционно-специфическим характером формирования паттернов LD, а наблюдаемые различия отражают значительную этноспецифическую вариабельность гаплотипических блоков [18]. Л 60 50 40 30 20 К 10 ■ Генотип CC р Генотип CT ! Генотип TT 0 4 60 ί 50 40 -30 20 10 - m ■ 1 1 1 1 ■ ■ 1 1 1 ■ ■ 1 1 I 1 1 1 1 2 3 4 5 в Генотип TT ■ Генотип CT * Генотип CC 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 -1-1-1-П-Г- 1 2 3 4 5 6 ■ ■ Генотип GG ■ Генотип GC • Генотип CC 12 3 4 Рис. 2. Частоты генотипов полиморфных участков гена TGFB1 в различных популяциях европеоидов . Л - SNP -509C>T. 1 - Россия, контрольная группа настоящего исследования; 2 - Италия [6]; 3 - Германия [5]; 4 - Англия [14]; 5 - исследование ECTIM (Франция + Северная Ирландия) [1]. Б — SNP 869T>C. 1-Россия, контрольная группа настоящего исследования; 2 - Россия, лица мужского пола [17]; 3 - Италия [6]; 4 - Германия [5]; 5 - Англия [14]; 6 - исследование ECTIM (Франция + Северная Ирландия) [1]. В - SNP 915G>C. 1 - Россия, контрольная группа настоящего исследования; 2 - Германия [5]; 3 - Англия [14]; 4 -исследование ECTIM (Франция + Северная Ирландия) [1]. * p = 0.001. Б 0 В 80 | ACTA NATURAE | ТОМ 4 № 2 (13) 2012 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ СТАТЬИ Нами показано участие гена TGFB1, а именно вклад носительства полиморфных участков -509c>T, 869T>C и 915G>C гена TGFB1, а также их сочетаний, в формирование генетической предрасположенности к ИМ в этнической группе русских. Сопоставление уровней значимости и величин ОШ для этих сочетаний с параметрами отдельных аллелей/генотипов позволяет сделать вывод, что в случае их совместного носительства имеет место кумулятивный эффект, отражающий скорее всего суммирование независимых вкладов разных полиморфных участков одного и того же гена в развитие ИМ. Поскольку все найденные нами аллели/генотипы риска (TGFB1*-509T, TGFB1*869T/T и TGFB1*915G/G) связаны с более высоким уровнем экспрессии гена [2-4], можно предположить, что кумулятивная ассоциация определяется однонаправленностью изменения уровня белка TGF-ß1. При анализе предрасположенности к раннему ИМ мы наблюдали значимые ассоциации с SNP TGFB1*-509C>T и 869T>C, но не с 915G>C. В случае повторных ИМ - значимые ассоциации найдены только с SNP TGFB1*-509c>T. При этом аллелями риска оказались те же аллели, что и в общей группе пациентов. Таким образом, SNP -509c>T и SNP 869T>c можно рассматривать в качестве независимых от возраста маркеров ИМ, в том числе и раннего ИМ, а SNP TGFB1*-509C>T может служить прогностическим маркером развития повторных ИМ. При этом нельзя исключить, что сужение числа ассоциированных маркеров в рассмотренных подгруппах по сравнению с общей группой пациентов может быть связано с уменьшением размеров выборок. Найденные нами ассоциации в целом согласуются с результатами, полученными для других европеоидов, хотя следует отметить достаточно большой разброс опубликованных данных. Результаты изучения раннего ИМ в итальянской популяции [6] и исследования ECTIM, выполненного на французской и североирландской популяциях [1], аналогичны нашим данным о предрасполагающей к ИМ роли аллелей TGFB1*-509T и TGFB1*915G соответственно. Наши результаты о позитивной ассоциации аллеля TGFB1*869T совпали с данными для немецкой популяции [5], но противоречат данным для итальянской популяции [6]. В ряде публикаций не выявлено значимых ассоциаций с ИМ этих полиморфизмов у европеоидов. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 1. Cambien F., Ricard S., Troesch A., Mallet C., Generenaz L., Evans A., Arveiler D., Luc G., Ruidavets J.B., Poirier O. // Hypertension. 1996. V. 28. № 5. P. 881-887. Цитокин TGF-ß1, секретируемый различными типами клеток, включая мононуклеарные клетки крови, гладкомышечные клетки сосудов и фибробласты, участвует в образовании и ремоделировании сосудов, в дифференцировке и миграции клеток [19]. Он играет важную роль в патогенезе ССЗ, в том числе и атеросклероза (включая ИБС и ИМ), гипертонической болезни, гипертрофии миокарда и фибротических явлений, приводящих к сердечной недостаточности и рестенозу после операций на сердце [20]. В некоторых исследованиях обнаружено, что TGF-ß1 обладает антиатерогенным действием: он подавляет воспаление и усиливает стабилизацию атеросклеротической бляшки. С другой стороны, высокий уровень TGF-ß1 ассоциирован со стенозом сосудов и тромбообразованием [20], усиливает фиброз и подавляет регенерацию эндотелия [21], т.е. является проатерогенным фактором. В частности, он может способствовать раннему появлению липидного пятна, стимулируя образование внеклеточного матрикса и подавляя его деградацию [20]. Исходя из данных о роли TGF-ß1 в патогенезе атеросклероза, можно предположить, что в зависимости от совокупности других факторов неблагоприятным при развитии ИМ может быть как низкий, так и высокий уровень TGF-ß1, а соответственно носительство альтернативных аллелей полиморфных участков гена, влияющих на уровень продукции белка. Одним из таких факторов может быть этническое своеобразие исследуемых групп. ВЫВОДЫ Полученные нами данные об ассоциации с ИМ аллелей/генотипов SNP TGFB1*-509T, TGFB1*869T/T и TGFB1*915G/G, связанных с более высоким уровнем экспрессии гена [2-4], могут указывать на доминирование проатерогенных функций этого цитокина при ИМ у русских. Совокупность полученных результатов свидетельствует о важной роли гена TGFB1 в формировании предрасположенности к ИМ у этнических русских и лишний раз доказывает необходимость изучения генетических факторов в каждой отдельной этнической группе. ·

Об авторах

Р. M. Барсова

Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова Минздравсоцразвития Российской Федерации; Российский кардиологический научно-производственный комплекс Минздравсоцразвития Российской Федерации

Автор, ответственный за переписку.
Email: olga_favorova@mail.ru
Россия

Б. В. Титов

Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова Минздравсоцразвития Российской Федерации; Российский кардиологический научно-производственный комплекс Минздравсоцразвития Российской Федерации

Email: olga_favorova@mail.ru
Россия

Н. A. Матвеева

Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова Минздравсоцразвития Российской Федерации; Российский кардиологический научно-производственный комплекс Минздравсоцразвития Российской Федерации

Email: olga_favorova@mail.ru
Россия

A. В. Фаворов

Институт общей генетики им. Н.И. Вавилова РАН; Oncology Biostatistics and Bioinformatics, Johns Hopkins School of Medicine

Email: olga_favorova@mail.ru
Россия

И. Н. Рыбалкин

Российский кардиологический научно-производственный комплекс Минздравсоцразвития Российской Федерации

Email: olga_favorova@mail.ru
Россия

Т. Н. Власик

Российский кардиологический научно-производственный комплекс Минздравсоцразвития Российской Федерации

Email: olga_favorova@mail.ru
Россия

Э. М. Тарарак

Российский кардиологический научно-производственный комплекс Минздравсоцразвития Российской Федерации

Email: olga_favorova@mail.ru
Россия

T. С. Сухинина

Российский кардиологический научно-производственный комплекс Минздравсоцразвития Российской Федерации

Email: olga_favorova@mail.ru
Россия

Р. M. Шахнович

Российский кардиологический научно-производственный комплекс Минздравсоцразвития Российской Федерации

Email: olga_favorova@mail.ru
Россия

M. Я. Руда

Российский кардиологический научно-производственный комплекс Минздравсоцразвития Российской Федерации

Email: olga_favorova@mail.ru
Россия

O. O. Фаворова

Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова Минздравсоцразвития Российской Федерации; Российский кардиологический научно-производственный комплекс Минздравсоцразвития Российской Федерации

Email: olga_favorova@mail.ru
Россия

Список литературы

Дополнительные файлы