Оптимизация схемы выделения и рефолдинга внеклеточного домена HER2, экспрессированного в клетках

Обложка

Цитировать

Полный текст

Аннотация

Рецептор-2 эпидермального ростового фактора человека (HER2/neu, c-erbB2) является протоонкогенным белком размером 185 кДа, характеризующимся гиперэкспрессией при ряде онкологических заболеваний, включающих 30% случаев рака молочной железы. Иммунодиагностика HER2-статуса опухоли имеет большое значение для успешной борьбы с заболеванием, в связи с чем получение значительных количеств экстраклеточного домена (ECD) HER2 остается весьма актуальной задачей. Наработка ECD HER2 в Escherichia coli имеет ряд преимуществ по сравнению с использованием эукариотических систем экспрессии, однако большая часть рекомбинантного продукта накапливается в бактериях в виде нерастворимых белковых включений. В данной работе мы осуществили эффективную наработку ECD HER2 в E. coli в виде нерастворимых белковых включений и предложили простую, эффективную и быстровыполнимую схему солюбилизации, рефолдинга и выделения белка в растворимой форме.

Об авторах

В. В. Долгих

Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова Министерства здравоохранения РФ

Автор, ответственный за переписку.
Email: vtetzv@yahoo.com
Россия

И. В. Сендерский

Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова Министерства здравоохранения РФ

Email: vtetzv@yahoo.com
Россия

Г. В. Тец

Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова Министерства здравоохранения РФ

Email: vtetzv@yahoo.com
Россия

В. В. Тец

Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова Министерства здравоохранения РФ

Email: vtetzv@yahoo.com
Россия

Список литературы

  1. Coussens L., Yang-Feng T.L., Liao Y.C., Chen E., Gray A., McGrath J., Seeburg P.H., Libermann T.A., Schlessinger J., Francke U. // Tyrosine kinase receptor with extensive homology to EGF receptor shares chromosomal location with neu oncogene. // Science. 1985, V.230, P.1132-1139
  2. Marmor M.D., Skaria K.B., Yarden Y. // Signal transduction and oncogenesis by ErbB/HER receptors. // Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. 2004, V.58, P.903-913
  3. Tan M., Yu D. // Molecular mechanisms of erbB2-mediated breast cancer chemoresistance. // Adv. Exp. Med. Biol. 2007, V.608, P.119-29
  4. Santin A.D., Bellone S., Roman J.J., McKenney J.K., Pecorelli S. // Trastuzumab treatment in patients with advanced or recurrent endometrial carcinoma overexpressing HER 2/neu. // Int. J. Gynaecol. Obstet. 2008, V.102, №2, P.128-31
  5. Menard S., Balsari A., Casalini P., Tagliabue E., Campiglio M., Bufalino R., Cascinelli N. S. // HER -2-positive breast carcinomas as a particular subset with peculiar clinical behavior // Clin. Cancer Res. 2002, V.8, P.520-525
  6. Sandri M.T., Johansson H., Colleoni M., Zorzino L., Passerini R., Orlando L., Viale G. // Serum levels of HER 2 EC D can determine the response rate to low dose oral cyclophosphamide and methotrexate in patients with advanced stage breast carcinoma. // Anticancer Res. 2004, V.24, P.1261-1266
  7. Disis M.L., SchiVman K., Guthrie K., Salazar L.G., Knutson K.L., Goodell V., dela Rosa C., Cheever M.A. // Effect of dose on immune response in patients vaccinated with an her-2/neu intracellular domain protein-based vaccine. // J. Clin. Oncol. 1996, V.22, №10, P.1916-1925
  8. Pichon M.F., Hacene K., Guepratte S., Neumann R. // Serum HER -2 extracellular domain (EC D) before the first metastasis in 128 breast cancer // Clin. Lab. 2004, V.50, №3-4, P.163-170
  9. Leary A.F., Hanna W.M., van de Vijver M.J., Penault-Llorca F., Rüschoff J., Osamura R.Y., Bilous M., Dowsett M. // Serum HER -2 extracellular domain (EC D) before the first metastasis in 128 breast cancer patients. // Clin. Lab. 2009, V.27, №10, P.1694-1705
  10. Lennon S., Barton C., Banken L., Gianni L., Marty M., Baselga J., Leyland-Jones B. // Utility of serum HER 2 extracellular domain assessment in clinical decision making: pooled analysis of four trials of trastuzumab in metastatic breast cancer. // J Clin Oncol. 2009, V.27, №10, P.1685-1693
  11. Belimezi M.M., Papanastassiou D., Merkouri E., Baxevanis C.N., Mamalaki A. // Growth inhibition of breast cancer cell lines overexpressing Her2/neu by a novel internalized fully human Fab antibody fragment. // Cancer Immunol. Immunother. 2006, V.55, №9, P.1091-1099
  12. Liu X., He Z., Zhou M., Yang F., Lv H., Yu Y., Chen Z. // Purification and characterization of recombinant extracellular domain of human HER 2 from Escherichia coli. // Protein Expr. Purif. 2007, V.53, №2, P.247-254
  13. Dimitriadis A., Gontinou C., Baxevanis C.N., Mamalaki A. // The mannosylated extracellular domain of Her2/neu produced in P. pastoris induces protective antitumor immunity. // BMC Cancer. 2009, V.9, P.386
  14. Waugh D.S. // Making the most of affinity tags. // Trends Biotechnol. 2005, V.23, №6, P.316-320
  15. Nallamsetty S., Waugh D. // Solubility-enhancing proteins MBP and NusA play a passive role in the folding of their fusion partners. // Protein Expr. Purif. 2006, V.45, №1, P.175-182
  16. Nallamsetty S., Waugh D.S. // A generic protocol for the expression and purification of recombinant proteins in Escherichia coli using a combinatorial His6-maltose binding protein fusion tag. // Nature Protocols 2007, V.2, №2, P.383-391
  17. Dolgikh V.V., Senderskiy I.V., Tetz G.V., Tetz V.V. // Extracellular domain of HER 2 heterologous expression in bacteria. Accepted for publication by Uchenye zapiski Sankt-Peterburguskogo Gosudarstvennogo Meditsinskogo Universiteta im. acad. I.P. Pavlova (Proceedings of St. Petersburg State Pavlov Medical University) in September 2013 (in Russian). 2013
  18. Vogelstein B., Gillespie D. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1979, V.76, №2, P.615-619
  19. Miroux B., Walker J.E. // J. Mol. Biol. 1996, V.260, P.289-298
  20. Laemmli U.K. // Nature 1970, V.227, P.680-685
  21. Cleland W.W. // Biochemistry. 1964, V.3, P.480-482

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать

© Долгих В.В., Сендерский И.В., Тец Г.В., Тец В.В., 2014

Creative Commons License
Эта статья доступна по лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License.

Данный сайт использует cookie-файлы

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, которые обеспечивают правильную работу сайта.

О куки-файлах