2-(2,4-Диокси-1,2,3,4-тетрагидропиримидин-1-ил)-N-(4-феноксифенил)ацетамиды как новый класс ингибиторов репликации цитомегаловируса

Полный текст

Цитомегаловирус (ЦМВ) широко распростра нен в человеческой популяции, он обнару жен у жителей всех без исключения геогра фических регионов, а также у представителей всех социально-экономических групп [1]. ЦМВ вызывает пожизненную латентную инфекцию, которая может периодически реактивироваться. У здоровых лю дей эта инфекция обычно протекает бессимптомно [2], тогда как у индивидов с пониженным иммунным статусом, в частности, у больных СПИДом [3] и ре ципиентов донорских органов, получающих имму носупрессоры [4], с ЦМВ связана значительная за болеваемость и смертность. ЦМВ считается наиболее опасной причиной врожденных заболеваний. Вирус способен передаваться от матери к плоду, что приво дит к мертворождению, врожденным дефектам и на рушениям развития [5]. При заболеваниях, вызванных ЦМВ, применя ются ганцикловир, цидофовир и фоскарнет, а так же их пролекарственные формы - валганцикловир и бринцидофовир [6]. Однако эти препараты вызы вают множество нежелательных побочных эффек тов [6]. Длительная терапия, проводимая при ЦМВ инфекции, может приводить к возникновению устойчивых вариантов ЦМВ [7], поэтому поиск но вых высокоэффективных анти-ЦМВ-агентов пред ставляет актуальную задачу. Недавно мы получили ряд 1-циннамил-3-бензил производных урацила, которые эффективно бло кировали репликацию ВИЧ-1 и ЦМВ в клеточных культурах [8], а также описали синтез и охарак теризовали свойства 1-[ω-(фенокси)алкил]произ водных урацила как анти-ЦМВ-агентов [9]. В про должение работы по поиску новых ингибиторов репликации ЦМВ нами синтезированы произво дные урацила, содержащие 4-феноксиацетанилид ный фрагмент в положении 3 остатка пиримиди нового основания, и изучены их противовирусные свойства. 2-Хлор-N-(4-феноксифенил)ацетамид (1) Суспензию 3.9 г (21.06 ммоль) 4-(фенокси)анилина (2) и 0.15 г NH4Cl в 25 мл ГМДС кипятили в течение 12 ч до образования прозрачного раствора. Избыток ГМДС удаляли при пониженном давлении, к остат ку (маслянистая жидкость темного цвета) добавля ли 50 мл безводного 1,2-дихлорэтана, а затем к рас твору при 0°С по каплям прибавляли 1.7 мл (21.37 ммоль) хлорацетилхлорида. Полученную смесь перемешивали при 0°С в течение 2 ч и оставляли на ночь при комнатной температуре. Затем реакци онную массу упаривали при пониженном давлении на роторном испарителе и перекристаллизовыва ли из смеси этилацетат-гексан (1 : 1). Полученный продукт представлял собой мелкокристаллическое вещество светло-лилового цвета (выход 80%), Тпл 105-106°C, Rf 0.62 (этилацетат-гексан, 1 : 1). 1H-ЯМР спектр (ДМСО-D6), δ, м.д., J (Гц): 4.24 (2H, s, COCH2), 6.97 (2H, d, J = 8.7, H-3’, H-5’), 7.00 (2H, d, J = 9.0, H-2’’, H-6’’), 7.10 (1H, t, J = 7.4, H-4’’), 7.36 (2H, t, J = 8.5, H-3’’, H-5’’), 7.61 (2H, d, J = 9.0, H-2’, H-6’), 10.30 (1H, s, NH). 13С-ЯМР-спектр (ДМСО-D6), δ, м.д.: 47.7, 122.2, 123.6, 125.4, 134.2, 138.5, 156.6, 161.4, 168.7. Общая методика синтеза 2-(2,6-диоксо- 3,6-дигидропиримидин-1(2H)-ил)- N-(4-феноксифенил)ацетамидов (4)-(11) Смесь 1.42 ммоль соответствующего 1-замещенного урацила (12)-(19) и 0.29 г (2.10 ммоль) K2CO3 в раство ре 10 мл ДМФА перемешивали при 80°C в течение 1 ч, охлаждали до комнатной температуры, добавляли 2.12 ммоль 2-хлор-N-(4-феноксифенил)ацетамида (1) и перемешивали при той же температуре в течение 24 ч. Затем реакционную массу фильтровали, упа ривали в вакууме и очищали флэш-хроматографией с последующей перекристаллизацией продукта из смеси этилацетат-гексан (1 : 1). 2-(3-Бензил-2,6-диоксо-3,6-дигидропиримидин- 1(2H)-ил)-N-(4-феноксифенил)ацетамид (4) Выход 85%, Тпл 186-187°C, Rf 0.60 (1,2-дихлорэтан- этилацетат, 1 : 1). 1Н-ЯМР-спектр (ДМСО-D6), δ, м.д., J (Гц): 4.21 (2Н, s, СН2), 4.53 (2Н, s, СН2), 5.38 (1Н, d, J = 7.8, Н-5), 6.51-6.56 (4Н, m, H-4’, H-3’, H-5’, H-4’’’), 6.65 (2Н, d, J = 8.5, H-2’, H-6’), 6.84-6.94 (6Н, m, H-3’’, H-5’’, H-2’’’, H-3’’’, H-5’’’, H-6’’’), 7.15 (2Н, d, J = 8.9, H-2’’, H-6’’), 7.43 (1Н, d, J = 7.8, Н-6), 9.88 (1Н, s, NH). 13С-ЯМР-спектр (ДМСО-D6), δ, м.д.: 42.9, 51.0, 100.1, 117.5, 119.1, 120.3, 122.6, 127,1, 127.4, 128.3, 129.5, 134.3, 136.1, 144.1, 150.8, 151.4, 156.9, 161.8, 164.7. 2-[3-(4-Метилбензил)-2,6-диоксо-3,6-дигидропиримидин-1(2H)-ил]-N-(4-феноксифенил) ацетамид (5) Выход 83%, Тпл 193-194°C, Rf 0.54 (1,2-дихлорэтан- этилацетат, 1 : 1). 1Н-ЯМР-спектр (ДМСО-D6), δ, м.д., J (Гц): 2.29 (3H, s, CH3), 4.65 (2H, s, CH2), 4.92 (2H, s, CH2), 5.80 (1H, d, J = 7.8, H-5), 6.98 (2H, d, J = 8.5, H-3’, H-5’), 7.00 (2H, d, J = 8.9, H-2’, H-6’), 7.10 (1H, dt, J = 7.3 и 1.0, H-4’’’), 7.19 (2H, d, J = 7.9, H-2’’, H-6’’), 7.23 (2H, d, J = 7.8, H-3’’, H-5’’), 7.36 (2H, dt, J = 7.4 и 1.2, H-3’’’, H-5’’’), 7.60 (2H, d, J = 8.8, H-2’’’, H-6’’’), 7.84 (1H, d, J = 8.0, H-6), 10.25 (1H, s, NH). 13С-ЯМР спектр (ДМСО-D6), δ, м.д.: 24.9, 47.5, 55.4, 104.7, 122.2, 123.7, 125.0, 127.2, 131.8, 133.4, 134.2, 137.7, 138.9, 141.3, 148.6, 155.4, 156.1, 161.6, 166.4, 169.3. 2-[3-(3,5-Диметилбензил)-2,6-диоксо-3,6 дигидропиримидин-1(2H)-ил]-N-(4-феноксифенил) ацетамид (6) Выход 79%, Тпл 99-101°C, Rf 0.53 (1,2-дихлорэтан- этилацетат, 1 : 1). 1Н-ЯМР-спектр (ДМСО-D6), δ, м.д., J (Гц): 2.24 с (6Н, СН3), 4.64 с (2Н, СН2), 4.87 с (2Н, СН2), 5.80 д (1Н, J = 7.9, Н-5), 6.92 с (3Н, Н-2’, H-4’, H-6’), 6.96 д (2H, J = 8.0, H-2’’, H-6’’), 6.98 д (2H, J = 8.9, H-3’’, H-5’’), 7.09 т (1H, J = 7.3, H-4’’’), 7.35 т (2H, J = 7.8, H-3’’’, H-5’’’), 7.58 д (2H, J = 8.8, H-2’’’, H-6’’’), 7.82 д (1H, J = 7.9, H-6), 10.29 c (1H, NH). 13С-ЯМР-спектр (ДМСО-D6), δ, м.д.: 25.1, 47.5, 55.6, 104.7, 122.1, 123.7, 124.9, 127.2, 129.5, 133.4, 134.2, 138.9, 140.5, 142.0, 148.7, 155.4, 156.1, 161.5, 166.4, 169.3. 2-(3-Циннамил-2,6-диоксо-3,6-дигидропиримидин-1(2H)-ил)-N-(4-феноксифенил)ацетамид (7) Выход 88%, Тпл 184-185°C, Rf 0.41 (1,2-дихлорэтан- этилацетат, 1 : 1). 1Н-ЯМР-спектр (ДМСО-D6), δ, м.д., J (Гц): 4.54 (2H, d, J = 5.6, CH2), 4.64 (2H, s, CH2), 5.81 (1H, d, J = 8.0, H-5), 6.34 (1H, dt, J = 6.0, =CH-), 6.60 (1H, d, J = 16.0, PhCH=), 6.96 (2H, d, J = 7.8, H-3’’, H-5’’), 6.98 (2H, d, J = 8.9, H-2’’, H-6’’), 7.09 (1H, t, J = 7.3, H-4’’’), 7.25 (1H, t, J = 7.4, H-4’), 7.33 (2H, t, J = 7.8, H-3’’’, H-5’’’), 7.35 (2H, t, J = 8.4, H-3’, H-5’), 7.43 (2H, d, J = 7.5, H-2’, H-6’), 7.58 (2H, d, J = 8.9, H-2’’’, H-6’’’), 7.77 (1H, d, J = 7.8, H-6), 10.28 (1H, s, NH). 13С-ЯМР-спектр (ДМСО-D6), δ, м.д.: 47.4, 54.2, 104.7, 122.1, 123.7, 125.0, 127.2, 128.0, 130.7, 132.2, 132.9, 134.2, 137.0, 138.9, 140.1, 148.4, 155.2, 156.1, 161.5, 166.5, 169.3. 2-[3-(Нафт-1-илметил)-2,6-диоксо-3,6 дигидропиримидин-1(2H)-ил]-N-(4-феноксифенил) ацетамид (8) Выход 85%, Тпл 197-198.5°C, Rf 0.57 (1,2-дихлорэтан- этилацетат, 1 : 1). 1Н-ЯМР-спектр (ДМСО-D6), δ, м.д., J (Гц): 4.72 (2H, s, CH2), 5.49 (2H, s, CH2), 5.85 (1H, d, J = 8.0, H-5), 6.99 (2H, d, J = 7.8, H-3’’, H-5’’), 7.02 (2H, d, J = 9.0, H-2’’, H-6’’), 7.11 (1H, t, J = 7.3, H-4’’’), 7.36 (1H, d, J = 7.1, H-4’), 7.37 (2H, dt, J = 8.6 и 0.9, H-3’’’, H-5’’’), 7.51 (1H, t, J = 7.9, H-6’), 7.57-7.63 (4H, m, H-3’, H-7’, H-2’’’, H-6’’’), 7.76 (1H, d, J = 7.8, H-6), 7.92 (1H, d, J = 8.3, H-8’), 7.99 (1H, d, J = 7.7, H-4’), 8.12 (1H, d, J = 8.2, H-5’), 10.28 (1H, s, NH). 13С-ЯМР-спектр (ДМСО-D6), δ, м.д.: 47.6, 53.2, 105.1, 122.2, 123.7, 125.0, 127.2, 129.1, 129.7, 130.4, 130.9, 132.5, 132.9, 134.2, 134.6, 136.1, 137.6, 138.9, 148.3, 155.6, 156.2, 161.6, 166.4, 169.3. 2-[3-[2-(Фенокси)этил]-2,6-диоксо-3,6 дигидропиримидин-1(2H)-ил]-N-(4-феноксифенил) ацетамид (9) Выход 90%, Тпл 154-155°C, Rf 0.46 (1,2-дихлорэтан- этилацетат, 1 : 1). 1Н-ЯМР-спектр (ДМСО-D6), δ, м.д., J (Гц): 4.16 (2H, d, J = 5.4, NCH2), 4.21 (2H, d, J = 5.4, OCH2), 4.64 (2H, s, CH2), 5.78 (1H, d, J = 8.0, H-5), 6.94- 7.00 (7H, m, H-2’, H-4’, H-6’, H-2’’, H-3’’, H-5’’, H-6’’), 7.10 (1H, t, J = 7.3, H-4’’’), 7.29 (2H, t, J = 7.9, H-3’’’, H-5’’’), 7.36 (2H, t, J = 7.6 и 1.2, H-3’, H-5’), 7.59 (2H, d, J = 8.9, H-2’’’, H-6’’’), 7.78 (1H, d, J = 7.9, H-6), 10.24 (1H, s, NH). 13С-ЯМР-спектр (ДМСО-D6), δ, м.д.: 29.7, 47.4, 52.4, 69.4, 104.0, 118.9, 122.2, 123.7, 125.0, 125.3, 127.2, 133.8, 134.1, 138.9, 149.3, 155.4, 156.2, 161.6, 162.2, 166.4, 169.3. 2-[3-(Бензилоксиметил)-2,6-диоксо-3,6 дигидропиримидин-1(2H)-ил]-N-(4-феноксифенил) ацетамид (10) Выход 84%, Тпл 163-164°C, Rf 0.47 (1,2-дихлорэтан- этилацетат, 1 : 1). 1Н-ЯМР-спектр (ДМСО-D6), δ, м.д., J (Гц): 4.59 (2H, s, CH2), 4.63 (2H, s, CH2), 5.26 (2H, s, CH2), 5.83 (1H, d, J = 7.8, H-5), 6.96 (2H, d, J = 7.9, H-3’’, H-5’’), 6.99 (2H, d, J = 8.9, H-2’’, H-6’’), 7.09 (1H, dt, J = 7.6 и 1.0, H-4’’’), 7.26-7.38 (7H, m, C6H’5, H-3’’’, H-5’’’), 7.59 (2H, d, J = 9.1, H-2’’’, H-6’’’), 7.84 (1H, d, J = 8.0, H-6), 10.32 (1H, s, NH). 13С-ЯМР-спектр (ДМСО-D6), δ, м.д.: 43.2, 70.4, 77.2, 100.9, 117.9, 119.5, 120.7, 123.0, 127.69, 127.74, 128.3, 130.0, 134.7, 137.4, 143.8, 151.3, 151.9, 157.4, 162.1, 165.1. 2-(3-Пропаргил-2,6-диоксо-3,6 дигидропиримидин-1(2H)-ил)-N-(4-феноксифенил) ацетамид (11) Выход 81%, Тпл 226-228°C, Rf 0.68 (1,2-дихлорэтан- этилацетат, 1 : 1). 1Н-ЯМР-спектр (ДМСО-D6), δ, м.д., J (Гц): 3.42 (1H, s, ≡CH), 4.59 (2H, s, CH2), 4.60 (2H, d, J = 8.0, CH2), 5.81 (1H, d, J = 8.0, H-5), 6.95 (2H, d, J = 7.7, H-3’’, H-5’’), 6.98 (2H, d, J = 8.9, H-2’’, H-6’’), 7.08 (1H, t, J = 7.6, H-4’’’), 7.35 (2H, dt, J = 8.5 и 1.1, H-3’’’, H-5’’’), 7.56 (2H, d, J = 8.9, H-2’’’, H-6’’’), 7.80 (1H, d, J = 7.9, H-6), 10.33 (1H, s, NH). 13С-ЯМР-спектр (ДМСО-D6), δ, м.д.: 42.0, 47.4, 80.3, 82.4, 105.1. 122.1, 123.7, 125.0, 127.3, 134.2, 138.8, 147.6, 154.8, 156.1, 161.5, 166.3, 169.2. Противовирусные исследования Оценивали активность соединений в отношении сле дующих вирусов: вируса герпеса простого типа 1 (ВГП-1) штамм KOS с дефицитом тимидинкиназы (TK-), ВГП-1 штамм KOS, резистентного к ацикло виру (ACVr), вируса герпеса простого типа 2, штаммы Lyons и G, ЦМВ (штаммы AD-169 и Davis), вируса ветряной оспы-опоясывающего лишая (ВЗВ, штам мы OKA и YS), вируса осповакцины штамм Lederle, респираторно-сицитиального вируса (штамм Long), вируса везикулярного стоматита, вируса Коксаки B4, вируса парагриппа 3, вируса гриппа A (подтипы H1N1, H3N2), вируса гриппа B, реовируса-1, вируса Синдбис и вируса Пунта Торо. Исследования прово дили в соответствии с [9]. Исходный 2-хлор-N-(4-феноксифенил)ацетамид (1) синтезирован в соответствии с условиями, раз работанными нами ранее [10]. Производные урацила, содержащие заместитель у атома азота N1 (12)-(19), получены конденсацией эквимолярных количеств 2,4-бис(триметилсилилокси)пиримидина и арилме тилхлорида/бромида в соответствии с [8]. Обработка эквимолярным количеством хлорида (1) в растворе ДМФА в присутствии K2CO3, как показано на схеме, вела к получению целевых 4-феноксиацетанилидов (4)-(11), выход которых составил 79-90%. Анти-ЦМВ-свойства производных урацила (4)-(11) были изучены в культуре клеток HEL в отно шении ЦМВ (штаммы AD-169 и Davis). Обнаружено, что некоторые соединения этой серии проявля ют мощную ингибиторную активность в отноше нии ЦМВ, сравнимую с действием ганцикловира. Наиболее активными оказались производные ура цила, содержащие в положении 1 пиримидинового кольца бензильный (соединение (4)) и 3,5-диметил бензильный (соединение (6)) заместители. Они ин гибировали репликацию ЦМВ в интервале концен траций EC50 = 3.06-8.9 мкМ. Другие модификации структуры сопровождались полной потерей ингиби торной активности. Обнаружено также, что соединения (4) и (6) проявляют заметную активность в отношении ВЗВ. Соединения блокировали репродукцию ВЗВ (штамм ОКА) в культуре клеток HEL в концен трации ЕС50 = 8.18 мкМ (соединение (4)) и 17.0 мкМ (соединение (6)), что уступает защитному дей ствию ацикловира (ЕС50 = 1.33 мкМ) и бривудина (ЕС50 = 0.026 мкМ), применяемых при инфекциях, вызванных этим вирусом [11]. Однако устойчивый к действию ацикловира и бривудина мутантный штамм ВЗВ (07-1), характеризующийся дефицитом тимидинкиназы, был чувствителен к 1-бензил-3 ацетанилид-производным урацила: ЕС50 = 6.68 мкМ (соединение (4)) и 16.1 мкМ (соединение (6)). Таким образом, производные урацила, синтез которых описан в данной работе, представляют со бой новый класс ингибиторов репродукции ЦМВ, сравнимый с действием ганцикловира. Кроме того, некоторые соединения данного ряда проявляют вы раженный ингибиторный эффект в отношении ВЗВ - как штамма дикого типа (ОКА), так и штамма (07-1), устойчивого к действию ацикловира. Полученные данные показывают перспективность данного на правления для поиска новых эффективных противо вирусных средств.

Об авторах

Д. A. Бабков

Волгоградский государственный медицинский университет

Email: m-novikov1@mail.ru
Россия

M. П. Парамонова

Волгоградский государственный медицинский университет

Email: m-novikov1@mail.ru
Россия

A. A. Озеров

Волгоградский государственный медицинский университет

Email: m-novikov1@mail.ru
Россия

A. Л. Хандажинская

Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН

Email: m-novikov1@mail.ru
Россия

R. Snoeck

Rega Institute for Medical Research

Email: m-novikov1@mail.ru
Бельгия

G. Andrei

Rega Institute for Medical Research

Email: m-novikov1@mail.ru
Бельгия

M. С. Новиков

Волгоградский государственный медицинский университет

Автор, ответственный за переписку.
Email: m-novikov1@mail.ru
Россия

Список литературы

Дополнительные файлы