Антигерпесвирусная эффективность фосфита ациклогуанозина, преодолевающего барьер резистентности к ацикловиру

Полный текст

ВВЕДЕНИЕ Инфекции, вызываемые вирусом простого герпеса (ВПГ), чрезвычайно широко распространены: от 50 до 95% взрослого населения Земли имеют антитела к ВПГ-1, а 20-30% людей к 15-29 годам являются носителями ВПГ-2, и с возрастом количество серо позитивных лиц увеличивается [1, 2]. После первич ного инфицирования вирусы герпеса устанавливают пожизненную латентную инфекцию с периодически развивающимися рецидивами. Способность ВПГ по ражать различные органы и ткани приводит к чрез вычайно широкому многообразию клинических про явлений инфекции - от поражений кожи, слизистых, глаз до генерализованных форм с поражением внутренних органов и ЦНС [3]. Поэтому для лече ния герпетических инфекций различной тяжести и локализации важно иметь лекарственные формы как для наружного использования, так и для систем ного введения. С этой целью в медицинской практике широко применяют аналоги нуклеозидов. Это пре жде всего известный противогерпетический агент АЦВ (АЦГ, зовиракс, 9-[(2-гидроксиэтокси)метил] гуанин), выпускаемый как в виде 5% мази, 5% крема, 3% глазной мази, так и в форме таблеток, суспензии для приема внутрь 8%, лиофилизированного порошка для приготовления инфузионного раствора, лиофи лизированного порошка для приготовления раство ра для инъекций (группа компаний GlaxoSmithKline и др.). Кроме того, к противогерпетическим препа ратам первого ряда относятся пенцикловир (ПЦВ, 1% крем) и метаболические предшественники АЦВ и ПЦВ - валиновый эфир АЦВ (Валтрекс, таблет ки в дозировке 250, 500 и 1000 мг) и фамцикловир (Фамвир, таблетки, покрытые оболочкой, 125, 250, 500 мг). Однако к этим препаратам у вирусов герпеса раз вивается резистентность. Частота выделения ВПГ с лекарственной устойчивостью в клинической практике зависит от иммунного статуса пациентов и колеблется от 0.5% у иммунокомпетентных паци ентов до 2-36% у иммунокомпромиссных больных [4, 5]. Описаны случаи, когда с устойчивыми к АЦВ вариантами ВПГ были ассоциированы заболевания с тяжелым клиническим течением (герпетическая пневмония, менингоэнцефалит, обширные кожно слизистые поражения и др.), которые могут приво дить к смерти больного [6-9]. Резистентность ВПГ к АЦВ обусловливается му тациями в генах TK (UL23) и/или pol-гене (UL30), с которыми связан механизм действия препарата. Первый этап фосфорилирования АЦВ с образова нием монофосфата катализируется вирусной ТК, два следующих - клеточными ферментами. АЦВ трифосфат (активный метаболит АЦВ) ингибирует вирусную ДНК-полимеразу, а кроме того, включа ется в синтезирующуюся цепочку ДНК и ингибиру ет элонгацию по терминационному механизму [10]. Резистентность клинических изолятов ВПГ к АЦВ в 95% случаев обусловлена мутациями в гене UL23, которые приводят, как правило, к потере или суще ственному снижению активности ТК (96%). Гораздо реже выделяют мутанты с измененной субстратной специфичностью ТК (4% от общего количества му тантов ТК) [6, 11]. Важно подчеркнуть, что из-за сходства меха низмов действия АЦВ и ПЦВ резистентность ВПГ к ним носит в большинстве случаев перекрестный характер, что приводит к снижению эффективности терапии, проводимой с использованием АЦВ, ПЦВ или их метаболических предшественников. В между народной практике в таких случаях используют три натриевую соль фосфономуравьиной кислоты (ФМК, фоскарнет) [12, 13]. Кроме того, есть положительный опыт применения в особо тяжелых случаях ЦДВ (цидофовир, вистид), когда ФМК также оказывался неэффективным [14]. Эти препараты в большинстве случаев одинаково эффективно подавляют репро дукцию как чувствительных, так и резистентных к АЦВ и ПЦВ вариантов ВПГ. К сожалению, ФМК и ЦДВ высокотоксичны и в России их использование не разрешено. Описаны также мутанты ВПГ, пере крестно резистентные к АЦВ/ПЦВ и ФМК и/или ЦДВ [15-17]. Поэтому разработка средств, эффек тивных против ВПГ, а также предотвращающих ре цидивы этого заболевания, весьма актуальна. Фосфит ациклогуанозина (Ф-АЦГ, Hp-ACV, фос фонат 9-[(2-гидроксиэтокси)метил]гуанина) представ ляет собой Н-фосфонатное производное АЦВ. Ранее на модели ВПГ-1 мы показали, что Ф-АЦГ проявляет противовирусную активность как in vitro (в клеточной культуре Vero Е6), так и in vivo (при в/б введении ин фицированным мышам). Было установлено, что этот препарат активен не только против эталонного штам ма ВПГ-1/L2, но также сохраняет активность в от ношении лабораторного АЦВ-резистентного штам ма ВПГ-1/L2/R и АЦВ-резистентных клинических изолятов ВПГ-1 (Avd и Sha), имеющих эпидемиче ское значение [18-21]. Таким образом, Ф-АЦГ может представлять интерес для практической медицины в качестве препарата, эффективно подавляющего ин фекцию, вызванную как чувствительным, так и рези стентными к АЦВ вариантами ВПГ-1. В представленной работе определена эффектив ность вводимого перорально Ф-АЦГ при генерали зованной герпетической инфекции у мышей, а также проведено сравнительное изучение мазевой лекар ственной формы Ф-АЦГ и АЦВ с целью разработки препарата для лечения кожных форм герпетической инфекции. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ Препараты Ф-АЦГ синтезирован в Институте молекуляр ной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН. В ка честве референс-препарата использовали АЦВ (9-[(2-гидроксиэтокси)метил]гуанин) производства GlaxoSmithKline (США/Великобритания). Вирусы и клетки В работе использовали ВПГ-1 штамм L2, полученный из Государственной коллекции Института вирусологии им. Д.И. Ивановского МЗ РФ. Культура клеток почек зеленой мартышки Vero E6 любезно предо ставлена А.М. Бутенко (Институт вирусологии им. Д.И. Ивановского МЗ РФ). Животные Морские свинки породы Агути весом 250 г (самцы) и белые линейные мыши BALB/c весом 8-9 г (сам цы) получены из питомника ФГБУН НЦБМТ ФМБА России Филиал «Столбовая» (Московская обл., Чеховский район, пос. Столбовая). Животные были здоровы, имели ветеринарный сертификат качества и состояния здоровья. Все процедуры проводились строго в соответствии с требованиями, изложенными в «Правилах проведения работ с использованием экс периментальных животных за № 755 от 12.08.1977». Цитотоксичность Цитотоксичность оценивали в соответствии с обще принятым методом окрашивания клеток трипановым голубым [20, 21]. За величину ЦД50 принимали кон центрацию вещества, которая обеспечивает гибель 50% клеток при инкубации в течение 72 ч. Противовирусная активность Противовирусную активность соединений in vitro оценивали микрометодом по способности защи щать инфицированные клетки от гибели, предот вращая развитие вирусиндуцированного ЦПЭ, в соответствии с методом De Clercq E. и соавт. [22], как описано нами ранее [20, 21]. Монослойную куль туру клеток Vero Е6, выращенную в пластиковых 96-луночных планшетах (Linbro, Flow laboratories, Великобритания), инфицировали с множественно стью 0.1 БОЕ/кл; продолжительность инкубации со ставляла 48 ч при 370C, при этом в контроле вируса развивался 95-100% ЦПЭ, т.е. ЦПЭ охватывал весь монослой клеток. Эффективность препарата количе ственно выражали как ИД50 и ИД95 - концентрации соединения, ингибирующие развитие вирусиндуци рованного ЦПЭ на 50% и практически полностью. Противогерпесвирусная активность Противогерпесвирусную активности соединений изучали на модели экспериментальной генерализо ванной инфекции мышей. Использовали адаптиро ванный к мозгу мышей ВПГ-1/L2. Инфекционный материал вводили в/б в объеме 200 мкл в дозе, обе спечивающей гибель 95 или 50% животных в кон трольной инфицированной нелеченной группе. Заражающая доза указана для каждого экспери мента отдельно. Животные получали тестируемые соединения, растворенные в трижды дистиллиро ванной воде или в физиологическом растворе, в/б или перорально в объеме 0.2 мл. Разовые дозы пре паратов и количество животных в группе указаны отдельно для каждого эксперимента. Соединения вводили дважды в день в течение 5 дней, первый раз через 1 ч после заражения. Срок наблюдения - 21 сутки. Эффективность препаратов оценивали по их способности защищать животных от гибели (процент выживаемости относительно контрольной инфици рованной, но нелеченной группы) и по увеличению СПЖ. За максимальную СПЖ принимали 21 день (срок наблюдения). Через 96 ч после заражения, когда в мозге зара женных животных инфекционный титр достигал максимальных значений, забивали по три мыши из каждой группы. Извлекали головной мозг и легкие и разрушали их в гомогенизаторе Даунса при темпе ратуре 40С. Готовили 10% суспензию в физиологиче ском растворе, центрифугировали ее при 5000 об/мин в течение 10 мин при 40С. Инфекционный титр вируса в супернатанте определяли методом бляшкообразо вания путем титрования в культуре клеток как опи сано ниже. Эффективность препарата оценивали по снижению величины инфекционного титра вируса в органном материале от животных опытной группы, получавших препарат, по сравнению с контрольной группой животных (инфицированных, но не лечен ных). Для оценки эффективности препаратов при экс периментальной кожной инфекции [23] на скарифи цированные после депиляции участки кожи морских свинок площадью около 5 см2 наносили вирусный ма териал с последующим его втиранием. Титр вируса составлял 7.87 lg БОЕ/мл. Через 48 ч после инокуляции ВПГ на инфициро ванной поверхности появлялось легкое покраснение, после чего начинали лечение путем аппликации мази 2 раза в день в течение 5 дней. В качестве основы при приготовлении мазей использовали ПЭГ-600. Инфекционный титр вируса Величину инфекционного титра вируса в везикуляр ной жидкости определяли методом бляшкообразова ния, описанным ниже. Забор везикулярной жидко сти проводили через 4 суток после инфицирования. Инфекционный титр вируса определяли методом бляшкообразования. 24-часовую культуру клеток, выращенную в 24-луночных пластиковых планшетах (Costar, США), заражали 10-кратными разведения ми вируса. Через 1 ч клеточный монослой отмывали от неадсорбировавшегося вируса физиологическим раствором, вносили среду покрытия (по 2 мл/лунку) и инкубировали при 370С в атмосфере 5% СО2. Среда покрытия состояла из сред Игла и 199 (производства Института полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П. Чумакова РАМН, Москва), соединенных в соотношении 1 : 1, 5% эмбриональной телячьей сы воротки («ПанЭко», Москва), 0.4% агарозы (Sigma, США). Через 48 ч среду покрытия удаляли, инфици рованные культуры фиксировали 10% нейтральным формалином, окрашивали 0.5% раствором генцианви олета и подсчитывали число бляшек [24]. Инфекционный титр «Т» вычисляли по формуле: T = Число бляшек в лунке × Кратность разведения Объем вносимого инокулюма и выражали в lg БОЕ/мл, где БОЕ - бляшкообразу ющая единица. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ Ранее нами было показано, что Ф-АЦГ одинако во эффективно селективно ингибирует репро дукцию как чувствительного, так и резистент ных к АЦВ штаммов ВПГ, включая лабораторный штамм ВПГ-1/L2/R и клинические изоляты Avd и Sha, которые циркулируют в человеческой по пуляции в настоящее время, относящиеся к наибо лее часто встречающемуся в клинической практике ТК-негативному/дефицитному фенотипу [18, 19]. Соответствующие данные приведены в табл. 1. Результаты, полученные in vitro, подтвержде ны в опытах in vivo на модели эксперименталь ной герпетической инфекции у белых мышей BALB/c. Так как инфекция, вызываемая вариантом ВПГ-1/L2/R, резистентным к АЦВ, не была леталь ной, то об эффективности Ф-АЦГ при в/б введении судили по его влиянию на накопление вируса в го ловном мозге животных. Показано, что при введе нии Ф-АЦГ (450 мг/кг, 2 раза в день) титр вируса на 4-й день снижался на 1.30 lg БОЕ/мл (с 3.31 ± 0.16 до 2.01 ± 0.11). Этот результат был сходен с эффек том Ф-АЦГ в аналогичных условиях на модели эта лонного штамма ВПГ-1: титр вируса снижался с 5.49 ± 0.25 до 4.01 ± 0.16 lg (летальность в контроле в по следнем случае составляла 92.5%; в опытной группе смертность снизилась до 67.5%, СПЖ увеличилась с 4.90 ± 0.75 до 10.25 ± 1.20) [18]. Нами установлен механизм формирования ре зистентности штаммов ВПГ-1/L2/R, Avd и Sha. Штаммы ВПГ-1/L2/R и Sha содержат мутации в гене UL23, которые приводят к замене R220H в ТК и, как следствие, к потере активности фермента. Такой фермент не способен катализировать первый этап фосфорилирования АЦВ, необходимый для его пре вращения в активный метаболит АЦВ-трифосфат, способный встраиваться в синтезирующуюся цепь вирусной ДНК и останавливать ее элонгацию по тер минационному механизму. В гене UL23 штамма Avd обнаружена делеция deltaT66, расположенная в не посредственной близости от ATР-связывающего сайта фермента (аминокислотные остатки 51-63), которая может обусловливать снижение эффектив ности фосфорилирования АЦВ [20, 25]. Полученные результаты подтверждают принадлежность всех включенных в исследование АЦВ-резистентных штаммов ВПГ к ТК-дефицитному фенотипу и позво ляют предположить, что мутации в области связы вания нуклеозидов и АТР-связывавающего центра не влияют существенно на метаболические превра щения Ф-АЦГ с образованием монофосфата АЦВ, который, подобно АЦВ, превращается далее в ди и трифосфат АЦВ. Однако это превращение происходит, по всей вероятности, альтернативным путем, минуя стадию деградации Ф-АЦГ до АЦВ [21]. Известно, что причиной гибели животных в ус ловиях генерализованной герпетической инфек ции является развитие герпетического энцефали та, и для проявления противовирусной активности препарат должен преодолевать гематоэнцефали ческий барьер и проникать в мозг инфицированных животных. Очевидно, что при в/б введении Ф-АЦГ в мозге животных создаются концентрации препара та, способные эффективно ингибировать репродук цию вируса. Однако биодоступность лекарственных препаратов при введении per os ниже, чем при в/б или внутривенном введении, и для сохранения ан тивирусной эффективности необходимо увеличи вать дозу препарата. Например, биодоступность АЦВ при оральном приеме не превышает 10-20%. При приеме 200 мг препарата per os максимальная концентрация АЦВ в сыворотке крови составляет 0.4-0.8 мкг/мл. Внутривенное введение стандарт ной дозы АЦВ (5 мг/кг 3 раза в сутки) обеспечивает существенно большую его концентрацию в сыворот ке крови - около 9.8 мкг/мл [26]. В ряде случаев пе роральное введение оказывается неэффективным. Так, из-за крайне низкой биодоступности при вве дении per os (< 5%) препарат ЦДВ вводится только внутривенно [27]. Биодоступность ПЦВ при ораль ном введении также очень низкая - 5% [28]. В свя зи с этим перорально ПЦВ применяют только в виде метаболического предшественника - фамциклови ра. Структурные модификации позволяют увеличить абсолютную биодоступность ПЦВ из фамцикловира до 77% после однократного орального введения [29]. Поэтому, развивая логически проведенное нами исследование антигерпетической активности Ф-АЦГ in vitro и in vivo [18, 19], мы изучили способность Ф-АЦГ, вводимого перорально, защищать мышей от гибели при экспериментальной генерализованной инфекции, вызванной ВПГ-1. Известно, что патогенность АЦВ-резистентных вариантов ВПГ, содержащих мутации в гене ТК, определяется их фенотипом, так как зависит от уровня активности ТК. В опытах на лаборатор ных животных показано, что у ТК-негативных и ТК дефицитных штаммов вирулентность, как правило, существенно снижена или такие штаммы авирулент ны, т.е. не способны вызывать летальную инфекцию у лабораторных животных и проявляться в виде зостерформы [30, 31]. Как отмечалось, использо ванные в предыдущей серии опытов резистентные к АЦВ штаммы ВПГ-1/L2/R, Avd и Sha относятся именно к ТК-негативному или ТК-дефицитному фе нотипам, поэтому в дальнейшем мы инфицировали животных исходным родительским штаммом ВПГ- 1/L2 с неизмененной лекарственной чувствитель ностью. Хотелось бы подчеркнуть, что способность ТК-дефицитных и ТК-негативных штаммов вызы вать тяжелые клинические формы герпетической инфекции обусловлена их естественной гетероген ностью. Присутствие в популяции ТК-позитивных вирусных частиц, способных синтезировать функ ционально активную ТК, позволяет компенсировать отсутствие или низкий уровень активности ТК АЦВ резистентных вирусных частиц [6, 32]. Инфицированные животные в опытных груп пах получали Ф-АЦГ в виде раствора в триж ды дистиллированной воде как описано в разделе «Экспериментальная часть». При выборе разовых доз Ф-АЦГ опирались на данные об эффективно сти препарата при в/б введении на модели экспе риментальной инфекции мышей, вызванной ВПГ-1: способность Ф-АЦГ защищать инфицированных животных от гибели была в 3-4 раза ниже по срав нению с АЦВ [18]. Из представленных в табл. 2 результатов видно, что в предложенных экспериментальных условиях перорально введенный Ф-АЦГ эффективно защи щает животных от гибели. Защитный эффект носит при этом выраженный дозозависимый характер: при увеличении дозы Ф-АЦГ увеличивались и по казатели выживаемости и СПЖ животных, что об условлено ингибированием репродукции вируса в мозге инфицированных животных. Однако эффек тивность Ф-АЦГ при пероральном введении была ниже, чем при в/б, при практически равной смертно сти животных в контрольных группах. Так, при 57% смертности в контроле, из 40 животных, получав ших препарат per os в дозе 300 мг/кг, погибло 29. Эффективность Ф-АЦГ при в/б введении в той же разовой дозе и по той же схеме была существенно выше - погибла лишь одна мышь из 40. Смертность в контроле в этом случае составляла 60% [19]. Снижение эффективности Ф-АЦГ и АЦВ при пе роральном введении (2 раза в сутки, 5 дней) по срав нению с в/б введением по той же схеме в обоих слу чаях оказалось примерно одинаковым: пероральная эффективность АЦВ была в 3-4 раза ниже, чем ин траперитонеальная. Так, в соответствии с нашими данными, при в/б использовании АЦВ в разовой дозе 25 мг/кг защитный эффект составлял 30%, а увели чение СПЖ - 5.2 суток при 65% смертности в кон трольной группе [33], что хорошо сопоставимо с по казателями эффективности АЦВ, вводимого мышам per os в разовой дозе 100 мг/кг (табл. 2). Важно подчеркнуть, что эффективность Ф-АЦГ при его пероральном введении в разовой дозе 300 мг/кг хорошо сопоставима с эффективностью АЦВ в разовой дозе 100 мг/кг, вводимого по той же схеме и в тех же экспериментальных условиях. Защита животных от гибели составляла в последнем случае 21.67%, увеличение СПЖ - 3.7 суток, снижение титра вируса в головном мозге - 0.73 lg. При сопоставлении этих данных с результатами, приведенными в табл. 1, видно, что различие по казателей эффективности Ф-АЦГ и АЦВ на моде ли генерализованной герпетической инфекции ока залось менее существенным, чем в опытах in vitro. Возможно, структурная модификация молекулы АЦВ (введение Н-фосфонатной группы) приводит к изменению фармакокинетических параметров препарата, например, повышает его биодоступность при пероральном введении. Антивирусный эффект Ф-АЦГ в разовой дозе 500 мг/кг при пероральном способе введения прибли жался к эффекту Ф-АЦГ в дозе 300 мг/кг при в/б введении (погибли три мыши из 40). Показатели СПЖ и снижение титра вируса в головном мозге также были сопоставимыми (отличие СПЖ от кон троля составило 9.64 и 8.43 суток, а снижение титра вируса 3.47 и 2.15 lg БОЕ/мл (в/б и пероральное вве дение соответственно). Таким образом, можно за ключить, что противогерпетическая эффективность Ф-АЦГ при пероральном введении снижена менее чем в 2 раза по сравнению с интраперитонеальным. Поскольку пероральный способ введения более удо бен, не требует участия квалифицированного мед персонала и безболезнен, то полученные результаты могут представлять практический интерес. Наиболее широко распространенными форма ми герпетической инфекции являются поражения кожи и слизистых, не затрагивающие внутренние органы и ЦНС. Например, рецидивы орофациально го герпеса (герпеса labialis) наблюдаются у 15-45% взрослого населения [34]. Так как герпетические поражения в большинстве случаев локализованы на ограниченной площади, то системное введение противогерпетических препаратов может быть не целесообразным. Оптимальными лекарственными формами в этом случае будут мази, кремы и гели для наружного нанесения. В случае эффективно го проникновения лекарства через кожу подобный способ не только гарантирует направленное из бирательное воздействие непосредственно на по раженные ткани, но и позволяет обеспечить тера певтическую концентрацию антивирусного агента в очаге инфекции при использовании в существен но меньших дозах, чем при системном введении. Следовательно, уменьшается токсическое воздей ствие препарата на организм, минимизируется риск развития нежелательных побочных эффектов, и, что также немаловажно, снижается стоимость курса терапии. Поэтому на следующем этапе исследова ний нам представлялось целесообразным изучить эффективность Ф-АЦГ при использовании в виде мазевой лекарственной формы. Так как экспериментальная кожная инфекция ВПГ морских свинок вызывается тем же вирусом, что и у человека, а ее проявления сходны с клини ческим течением кожной герпетической инфекции у человека, то для изучения противогерпетической активности веществ мы использовали эту модель. Предварительно на интактных морских свин ках оценили безопасность накожных аппликаций 5 и 10% мазей Ф-АЦГ, а также ПЭГ-600, служившего в наших экспериментах мазевой основой. Мази на носили на депилированные участки кожи дважды в день в течение 5 дней. Не обнаружено покраснения или изъязвления кожных покровов в месте нанесения мази, изменения поведения животных, снижения аппетита. Для оценки эффективности мазевой лекар ственной формы Ф-АЦГ животных инфицирова ли как подробно описано нами ранее [35] и приве дено в разделе «Экспериментальная часть». Для предупреждения развития генерализованной инфек ции, приводящей к гибели животного от энцефалита, мы использовали культуральный вирус ВПГ-1/L2, менее нейровирулентный, чем свежие клинические изоляты, или лабораторный вирус, прошедший пас сирование через мозг мышей. Так как точный расчет дозы препарата при мест ном использовании невозможен, испытуемые мази наносили тонким слоем непосредственно на пора женные участки кожи. В контроле в тех же условиях наносили плацебо в виде мазевой основы ПЭГ-600, не содержащей лекарственное средство. Визуальную оценку клинических проявлений экс периментальной инфекции проводили ежедневно. В контроле на 3-и сутки (72 ч после инфицирования) развивались характерные для герпетической инфек ции локальные поражения - пузырьковые высыпа ния (везикулы) около 2 мм как сгруппированные, так и одиночные. Еще через 24 ч (4-й день инфекции) интенсивность поражения достигала максимального развития, после чего начиналось постепенное под сыхание герпетических везикул с образованием ко рочек. Через 7-8 суток после инокуляции вируса на чиналось обратное развитие процесса (отторжение корочек). На 12-й день наблюдалась полная реэпи телизация. Для количественной характеристики активно сти соединения учитывали как достоверное умень шение тяжести клинических симптомов инфекции, так и сокращение сроков излечения под действием изучаемого вещества по сравнению с показателями в контроле. Соответствующие результаты приведены в табл. 3. При использовании мазевой лекарственной формы Ф-АЦГ (5%) через 2 суток (4 дня после инокуляции вируса) средняя площадь поражения в опыте была на 5.76% меньше, чем в контроле (Р < 0.05 при оценке с использованием t-теста Стьюдента), а количество герпетических высыпаний составило 95.55% по срав нению с контролем (Р < 0.3). Сроки начала обратного развития процесса и излечения (полная реэпители зация) при использовании 5% мази Ф-АЦГ сокраща лись на 1 сутки по сравнению с контролем. Лечебное действие Ф-АЦГ было более выражен ным при его применении в виде 10% мази и было хорошо сопоставимым с эффектом 5% мази АЦВ. В течение всего срока наблюдения в обоих случаях отмечалось более легкое клиническое течение ин фекции, что выражалось в снижении как количества везикулярных образований, так и площади пораже ния. Различие показателей, полученных в опытной и контрольной группах, оказалось статистически значимым (Р < 0.05 при использовании t-критерия Стьюдента). Обратное развитие процесса и излечение морских свинок наступало на 1 сутки раньше, чем в контроле. Из приведенных в табл. 3 данных видно, что во всех случаях использование мазевой лекар ственной формы не приводило к существенному сни жению инфекционного титра вируса в везикулярной жидкости. Поэтому нельзя утверждать, что способ ность Ф-АЦГ ингибировать развитие кожной гер петической инфекции, вызванной у морских свинок эталонным штаммом ВПГ-1/L2, происходит благо даря ингибированию репликации вируса в очаге ин фекции. Однако полученные результаты хорошо со гласуются с опубликованными данными о влиянии АЦВ при местном использовании на инфекционный титр ВПГ в аналогичных экспериментальных усло виях. При этом обнаружено статистически значимое уменьшение количества герпетических везикуляр ных образований и площади пораженной поверхно сти [36-38]. Вероятно, действие Ф-АЦГ при местном использовании носит прежде всего профилактиче ский характер, что выражается в предотвращении формирования герпетических высыпаний при нане сении препарата в продромальный период на стадии легкого покраснения, а не в ингибировании реплика ции вируса в уже образовавшихся везикулах. ЗАКЛЮЧЕНИЕ Таким образом, изучение эффективности лечеб ного действия Ф-АЦГ в опытах in vivo показало, что при использовании per os или в виде мазевой ле карственной формы Ф-АЦГ эффективно воздейству ет на генерализованную и кожную инфекцию, вы званную ВПГ-1. Несмотря на то что это соединение уступает АЦВ (для достижения хорошо сопостави мого лечебного эффекта необходимо увеличить кон центрацию Ф-АЦГ в 2 раза), оно способно ингибиро вать репродукцию вариантов вируса, резистентных к АЦВ, как показано нами в опытах in vitro и in vivo. Это делает потенциально возможным использование Ф-АЦГ в случаях, когда АЦВ оказывается неэффективным.

Об авторах

В. Л. Андронова

Институт вирусологии им. Д.И. Ивановского, Федеральный научно-исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи Минздрава РФ

Автор, ответственный за переписку.
Email: andronova.vl@yandex.ru
Россия

M. В. Ясько

Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН

Email: andronova.vl@yandex.ru
Россия

M. K. Куханова

Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН

Email: andronova.vl@yandex.ru
Россия

Г. A. Галегов

Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН

Email: andronova.vl@yandex.ru
Россия

Ю. С. Скоблов

Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН

Email: andronova.vl@yandex.ru
Россия

С. Н. Кочетков

Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН

Email: andronova.vl@yandex.ru
Россия

Список литературы

Дополнительные файлы