1-(4-Феноксибензил)-производные 5-аминоурацила и их аналоги - новые ингибиторы репликации аденовирусов человека

Полный текст

ВВЕДЕНИЕ Аденовирусы человека (HAdV) - безоболочечные вирусы, геном которых представлен линейной несегментированной двухцепочечной ДНК [1]. Аденовирусные инфекции, которым подвержены люди всех возрастных групп, характеризуются широким распространением и высокой контагиозностью. Аденовирусы человека чаще всего поражают слизистые оболочки дыхательных путей [2, 3], глаз [4], желудочно-кишечного тракта [5]) и мочеполовой системы [6]. Наибольшую опасность аденовирусные инфекции представляют для пациентов с нарушениями иммунной системы (реципиентов трансплантатов гемопоэтических стволовых клеток, ВИЧ инфицированных и др.) [7, 8], у которых аденовирусы могут вызывать развитие острых инфекционных заболеваний, приводящих к летальному исходу [9]. Селективные химиотерапевтические средства, высокоэффективные при аденовирусных инфекциях, в настоящее время отсутствуют [10]. Как правило, используют противовирусные средства широкого спектра действия, такие, как интерферон или индукторы интерферона и препараты на основе кортикостероидов [11]. Однако лекарственные средства, относящиеся к группе индукторов интерферона, недостаточно эффективны из-за нечувствительности аденовирусов к интерферону. Невысокой активностью обладают и производные ациклонуклеотидов, например цидофовира - (S)-1-(3 гидрокси-2-фосфонилметоксипропил)цитозин [12], применение которого ограничивает высокая нефротоксичность [13]. Таким образом, актуальным остается поиск нетоксичных химиопрепаратов, эффективных при аденовирусных инфекциях. Цель представленной работы состояла в изучении ингибиторных свойств новых 5-аминопроизводных урацила [14] в отношении аденовирусов человека. В результате анализа взаимосвязи структуры и биологической активности производных урацила, изученных ранее [15], были сконструированы и синтезированы новые производные 5-аминоурацила, предположительно являющиеся ингибиторами ДНК содержащих вирусов. Показано, что эти соединения с высокой эффективностью подавляют репликацию аденовирусов человека in vitro. Кроме того, изучена зависимость противоаденовирусного действия от наличия различных заместителей в структуре соединения. Так, определена ключевая роль ароматического фрагмента в выраженности ингибиторной активности исследованных соединений. Таким образом, выявлен новый тип ингибиторов репликации аденовирусов человека. Полученные данные могут послужить основой для исследований в области разработки новых средств противовирусной терапии in vivo. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ Спектры ЯМР 1 Н и 13С регистрировали на спектрометре Bruker Avance 400 (Bruker, Германия) (400 МГц для 1 H и 100 МГц для 13С) в ДМСО-D6 , внутренний стандарт тетраметилсилан. Тонкослойную хроматографию выполняли на пластинах TLS Silica gel 60 F254 (Merck, Германия), используя в качестве элюента этилацетат. Пластины проявляли с помощью УФ-лампы VL-6.LC (Vilber, Франция). Температуры плавления измеряли в стеклянных капиллярах на приборе Mel-Temp 3.0 (Laboratory Devices Inc., США). Исходные 5-(фениламино)урацилы и -6-азаурацилы синтезировали согласно [16] , 5-(морфолино)урацил - в соответствии с [17], 4-(фенокси)бензилбромиды получены путем бромирования исходных 4-(фенокси)толуолов молекулярным бромом при облучении светом в кипящем хлороформе в соответствии с [14]. Синтез исходных 1-[ω-(фенокси)алкил]-5-бромурацилов осуществляли путем конденсации эквимолярных количеств 2,4-бис(триметилсилилокси)-5-бромпиримидина и 1-бром-ω-(фенокси)алкана при нагревании до 160-170°С в течение 1 ч согласно [18]. Общий метод получения 1-[4-(фенокси)бензил]-5 амино-производных 6-азаурацила (1), (2) и урацила (соединения (3)-(5)) Суспензию 4.90 ммоль 5-амино-6-азаурацила или 5-аминоурацила и 0.1 г (1.87 ммоль) NH4 Cl в 30 мл гексаметилдисилазана (ГМДС) кипятили в течение 12 ч до образования прозрачного раствора. Избыток ГМДС удаляли при пониженном давлении, остаток растворяли в 50 мл безводного 1,2-дихлорэтана, добавляли 4.94 ммоль 4-(фенокси)бензилбромида, после чего полученную смесь кипятили с защитой от влаги воздуха в течение 24 ч. Реакционную массу охлаждали до комнатной температуры, обрабатывали 10 мл изопропилового спирта, упаривали при пониженном давлении, остаток чистили флэш-хроматографией, элюируя смесью хлороформ-метанол (10 : 1). Фракции, содержащие продукт, объединяли и упаривали досуха при пониженном давлении. Твердый остаток перекристаллизовывали из смеси этилацетат-гексан (2 : 1). 1-[4-(Фенокси)бензил]-5-(фениламино)-6-азаурацил (1). Выход 67%, Тпл 264-266°С, Rf 0.76 (этилацетат). 1 H-ЯМР (ДМСО-D6 ), δ, м.д.: 4.95 (2H, с, CH2 ); 6.89-7.03 (5H, м, H-2’, H-3’, H-4’, H-5’, H-6’); 7.10 (1H, т, J = 7.1 Гц, H-4”’); 7.22 (2H, т, J = 7.6 Гц, H-3”’, H-5”’); 7.33 (2H, т, J = 7.7 Гц, H-3”, H-5”); 7.38 (2H, д, J = 8.2 Гц, H-2”, H-6”); 7.61 (2H, д, J = 7.8 Гц, H-2”’, H-6”’); 8.33 (1H, с, N3 H); 13C-ЯМР (ДМСО-D6 ), δ, м.д.: 52.7; 119.0; 119.1; 119.3; 122.4; 123.9; 128.9; 130.3; 130.4; 132.5; 139.8; 140.0; 148.0; 154.7; 156.8; 157.3. 1-[4-(Фенокси)бензил]-5-[(3,5-дихлорфенил)амино]- 6-азаурацил (2). Выход 56%, Тпл 224.5-226°С, Rf 0.78 (этилацетат). 1 H-ЯМР-спектр (ДМСО-D6 ), δ, м.д.: 4.95 (2H, c, CH2 ); 6.93-6.98 (4H, м, H-2”’, H-4”’, H-6”’, NH); 7.10 (1H, т, J = 6.9 Гц, H-4’); 7.22 (2H, т, J = 7.6 Гц, H-3’, H-5’); 7.33 (2H, д, J = 7.5 Гц, H-2’, H-6’); 7.39 (2H, д, J = 8.2 Гц, H-3”, H-5”); 7.61 (2H, д, J = 7.8 Гц, H-2”, H-6”); 8.33 (1H, c, N3 H); 13С-ЯМР-спектр (ДМСО-D6 ), δ, м.д.: 31.1; 36.1; 40.3; 51.9; 116.9; 118.9; 120.9; 123.8; 130.3; 130.5; 132.0; 134.2; 139.6; 142.1; 147.9; 154.3. 1-[4-(Фенокси)бензил]-5-(морфолино)урацил (3). Выход 68%, Тпл 182-184°С, Rf 0.41 (этилацетат). 1 H-ЯМР (ДМСО-D6 ), δ, м.д.: 2.82 (4H, c, 2 × CH2 ); 3.64 (4H, т, J = 4.4 Гц, 2 × CH2 ); 4.82 (2H, c, CH2 ); 6.96 (2H, д, J = 8.3 Гц, H-2’, H-6’); 6.98 (2H, д, J = 8.0 Гц, H-3”, H-5”); 7.13 (1H, т, J = 8.0 Гц, H-4’); 7.18 (1H, c, H-6); 7.32-7.36 (4H, м, H-3’, H-5’, H-2”, H-6”); 11.37 (1H, c, N3 H). 13C-ЯМР (ДМСО-D6 ), δ, м.д.: 40.3; 50.2; 50.4; 66.3; 118.9; 119.0; 123.9; 127.2; 129.7; 130.2; 130.4; 132.3; 150.1; 156.5; 156.8; 161.2. 1-[4-(4-Хлорфенокси)бензил]-5-(морфолино)урацил (4). Выход 81%, Тпл 204-206°С, Rf 0.32 (этилацетат). 1 H-ЯМР-спектр (ДМСО-D6 ), δ, м.д.: 2.82 (4H, c, 2 × CH2 ); 3.64 (4H, c, 2 × CH2 ); 4.80 (2H, c, CH2 ); 6.80 (2H, д, J = 7.6 Гц, H-2’, H-6’); 7.12 (2H, д, J = 7.4 Гц, H-3’, H-5’); 7.39 (2H, д, J = 8.2 Гц, H-3”, H-5”); 7.61 (2H, д, J = 7.8 Гц, H-2”, H-6”); 7.70 (1H, с, H-6); 11.42 (1H, с, N3 H). 13С-ЯМР-спектр (ДМСО-D6 ), δ, м.д.: 50.1; 50.5; 67.0; 118.8; 121.1; 122.5; 123.2; 124.5; 134.0; 134.1; 138.5; 149.8; 154.2; 160.1; 164.2. 1-[4-(4-Фторфенокси)бензил]-5-(морфолино)урацил (5). Выход 74%, Тпл 220-222°С, Rf 0.34 (этилацетат). 1 H-ЯМР-спектр (ДМСО-D6 ), δ, м.д.: 2.85 (4H, c, 2 × CH2 ); 3.66 (4H, c, 2 × CH2 ); 4.79 (2H, c, CH2 ); 6.79 (2H, д, J = 7.9 Гц, H-2’, H-6’); 7.11 (2H, д, J = 7.4 Гц, H-3’, H-5’); 7.36 (2H, д, J = 8.2 Гц, H-3”, H-5”); 7.60 (2H, д, J = 7.9 Гц, H-2”, H-6”); 7.69 (1H, с, H-6); 11.47 (1H, с, N3 H). 13С-ЯМР-спектр (ДМСО-D6 ), δ, м.д.: 50.2; 50.6; 67.0; 118.8; 121.1; 122.5; 123.2; 124.5; 134.0; 134.1; 138.5; 149.8; 154.0; 154.2; 158.8; 160.1; 164.2. Общий метод получения 1-[ω-(фенокси)алкил]-5-(морфолино)урацила (соединения (6)-(8)) Смесь 4.61 ммоль 5-бром-1-[ω-(фенокси)алкил]урацила и 1 мл (11.56 ммоль) морфолина кипятили в растворе 50 мл безводного этиленгликоля в течение 2 ч, охлаждали до комнатной температуры, добавляли к 250 мл холодной воды и оставляли на ночь при температуре 4оС. Образовавшийся осадок отфильтровывали и перекристаллизовывали из смеси этилацетат-гексан (3 : 1). 1-[3-(Фенокси)пропил]-5-(морфолино)урацил (6). Выход 66%, Тпл 169-170°С, Rf 0.31 (этилацетат). 1 H-ЯМР-спектр (ДМСО-D6 ), δ, м.д.: 2.04 (2H, кв, J = 6.3 Гц, CH2 ); 3.77 (2H, т, J = 6.0 Гц, NCH2 ); 3.87 (2H, т, J = 5.7 Гц, CH2 ); 2.82 (4H, c, 2 × CH2 ); 3.69 (4H, c, 2 × CH2 ); 6.82-6.86 (3H, м, H-2’, H-4’, H-6’); 7.19 (2H, т, J = 8.0 Гц, H-3’, H-5’); 7.63 (1H, с, H-6); 11.37 (1H, с, N3 H). 13С-ЯМР-спектр (ДМСО-D6 ), δ, м.д.: 28.0; 45.4; 50.1; 50.5; 64.6; 100.9; 112.2; 122.3; 138.6; 145.8; 151.0; 158.4; 163.9. 1-[4-(Фенокси)бутил]-5-(морфолино)урацил (7). Выход 78%, Тпл 156-159°С, Rf 0.65 (этилацетат). 1 H-ЯМР-спектр (ДМСО-D6 ), δ, м.д.: 1.64 (4H, с, CH2 ); 3.67 (2H, т, J = 6.2 Гц, CH2 ); 3.89 (2H, т, J = 6.2 Гц, CH2 ); 2.85 (4H, c, 2 × CH2 ); 3.66 (4H, c, 2 × CH2 ); 6.79-6.83 (3H, м, H-2’, H-4’, H-6’); 7.13 (2H, т, J = 8.1 Гц, H-3’, H-5’); 7.64 (1H, с, H-6); 11.41 (1H, с, N3 H). 13С-ЯМР-спектр (ДМСО-D6 ), δ, м.д.: 25.3; 25.7; 47.3; 50.4; 51.0; 66.8; 100.9; 114.4; 120.5; 129.5; 145.7; 151.0; 158.6; 165.8. 1-[5-(Фенокси)пентил]-5-(морфолино)урацил (8). Выход 71%, Тпл 162-163.5°С, Rf 0.78 (этилацетат). 1 H-ЯМР-спектр (ДМСО-D6 ), δ, м.д.: 1.39 (2H, кв, J = 5.3 Гц, CH2 ); 1.63 (2H, кв, J = 7.2 Гц, CH2 ); 1.72 (2H, кв, J = 7.2 Гц, CH2 ); 3.67 (2H, т, J = 7.2 Гц, CH2 ); 3.93 (2H, т, J = 6.5 Гц, CH2 ); 2.88 (4H, c, 2 × CH2 ); 3.67 (4H, c, 2 × CH2 ); 6.83-6.88 (3H, м, H-2’, H-4’, H-6’); 7.22 (2H, т, J = 8.0 Гц, H-3’, H-5’); 7.55 (1H, с, H-6); 11.29 (1H, с, N3 H). 13С-ЯМР-спектр (ДМСО-D6 ), δ, м.д.: 22.9; 28.6; 28.7; 47.8; 50.5; 51.0; 67.5; 101.2; 114.8; 120.8; 129.9; 146.2; 151.4; 159.0; 164.3. Вирусы В работе использовали рекомбинантный аденовирус человека типа 5, экспрессирующий усиленный зеленый флуоресцентный белок (HAdV5-eGFP) [19, 20]. Культура клеток В работе использовали перевиваемые клетки эмбриона почки человека HEK293 [21]. Клетки линии НЕК293 культивировали на среде DMEM (Life Technologies, Великобритания), содержащей 10% эмбриональной сыворотки крупного рогатого скота (Life Technologies, Великобритания), 4 мM L-глутамина, 1 мM пирувата натрия, стрептомицин/пенициллин в концентрации 100 мкг/мл и 100 ед./мл соответственно при температуре 37о С в атмосфере 5% СО2. Тест МТТ Клетки линии НЕК293 инкубировали в отсутствие (контроль) или в присутствии различных концентраций исследуемых соединений. Через 24-72 ч к клеткам добавляли 3-[4,5-диметилтиазолил-2 ел]-2,5-дифенилтетразолийбромид (МТТ); итоговая концентрация МТТ составляла 0.5 мг/мл. После 2 ч экспозиции при 37°С живые клетки восстанавливали желтый МТТ до темно-фиолетовых гранул формазана. Культуральную среду убирали. Гранулы формазана растворяли в ДМСО, количество восстановленного продукта измеряли фотометрически на мультифункциональном планшетном ридере Synergy 2 Multi-Mode Reader (BioTek Instruments, США) при длинах волн 540 и 630 нм [22]. Резазуриновый метод Клетки линии НЕК293 инкубировали в отсутствие (контроль) или в присутствии различных концентраций исследуемых соединений. Через 24-72 ч к клеткам добавляли краситель резазурин (Sigma, США), который восстанавливается митохондриальными дегидрогеназами живых клеток до флуоресцирующего продукта резаруфина (при длинах волн возбуждения и эмиссии 530 и 590 нм). Интенсивность флуоресценции регистрировали на мультифункциональном планшетном ридере Synergy 2 Multi-Mode Reader (BioTek Instruments, США). Определение количества копий генома аденовируса человека Для оценки репликации HAdV5-eGFP через 24 ч после инфекции клетки собирали, выделяли суммарную ДНК с помощью набора QIAamp DNA Mini Kit (QIAGEN, Германия) согласно рекомендациям производителя. Количественную ПЦР проводили согласно [23] на приборе CFX96™ Real-Time PCR Detection System (Bio-Rad, США) с использованием реагента iTaq™ Universal Probes Supermix (Bio-Rad, США). Определение инфекционности аденовирусного потомства Клетки линии НЕК293 заражали HAdV5-eGFP с множественностью инфекции 1 и 10 БОЕ/клетку. Через 3 ч после инфекции добавляли растворы соединений (1) и (3) (примеры 1 и 3 соответственно) в ДМСО в концентрации 25 мкM. В качестве контроля использовали ДМСО, конечная концентрация которого в культуральной среде не превышала 0.1%. Через 48 ч культуральную среду собирали в микропробирки и замораживали при температуре -70оС. С целью разрушения клеток вируссодержащую среду размораживали при комнатной температуре и снова замораживали при -70оС. После повторного размораживания аликвоты 10-кратных разведений вируссодержащих стоков добавляли к клеткам линии НЕК293. Статистическая обработка данных Все данные представлены в виде средних значений ± стандартное отклонение (СО). Статистическую значимость определяли с использованием программного обеспечения GraphPad Prism 6 (GraphPad Software, США). Значение p <0.05 считали статистически значимым. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ Синтез соединений Наиболее близкими по химическому строению к синтезированным соединениям являются 1-бензил-5-(ариламино)-производные урацила [15]. Эти соединения проявляют активность в отношении вируса иммунодефицита человека типа 1 (ВИЧ-1) и вируса Эпштейна-Барр. Это позволило нам предположить, что производные 5-аминоурацила и 5-амино-6 азаурацила, содержащие заместитель у N1 и являющиеся аналогами описанных соединений, могут проявлять ингибиторную активность в отношении ДНК-содержащих вирусов, в частности аденовирусов. Синтез 1-[4-(фенокси)бензил]-производных 5-(фениламино)-6-азаурацила (1), 5-[(3,5-дихлорфенил)амино]-6-азаурацила (2), а также 1-[4-(фенокси)бензил]- (3), 1-[4-(4-хлорфенокси)бензил]- (4) и 1-[4-(4-фторфенокси)бензил]-производных 5-(морфолино)урацила (5) был осуществлен путем конденсации 6-амино-3,5-бис(триметилсилилокси)-1,2,4-триазина или 2,4-бис(триметилсилилокси)-5-(морфолино)пиримидина с эквимолярным количеством соответствующих 4-(фенокси)бензилбромидов при кипячении в растворе безводного 1,2-дихлорэтана в соответствии с ранее описанным методом [24]. При этом выход соединений (1)-(5) составил 56-81% (рис. 1). С целью изучения закономерности структура-противовирусная активность нами были синтезированы аналоги 5-(морфолино)-производного (3), у которых 4-(фенокси)бензильный фрагмент у N1 был заменен на ω-(фенокси)алкильный заместитель. Синтез соединений данной группы осуществлен путем аминирования морфолином 5-бром-1-[ω-(фенокси)алкил] урацила при кипячении в растворе этиленгликоля в соответствии с ранее описанным методом [15]. Выход целевых 5-(морфолино)-производных урацила (6)-(8) составил 66-78% (рис. 2). Цитотоксичноcть исследуемых соединений Цитотоксичность соединений оценивали с помощью прижизненного окрашивания клеток линии НЕК293 МТТ или трипановым синим [25]. К клеткам добавляли исследуемые соединения, растворенные в диметилсульфоксиде, в диапазоне концентраций 2.5-200 мкМ. Контролем служили клетки, к которым вместо исследуемых соединений добавляли соответствующее количество ДМСО. Прижизненное окрашивание клеток НЕК293 МТТ проводили через 48 ч после внесения веществ. Токсичность различных доз препарата определяли по жизнеспособности клеток относительно контроля. Все соединения в концентрациях до 25 мкМ не оказывали токсического действия на клетки НЕК293. Кроме того, была определена концентрация соединений, проявляющих ингибиторную активность в отношении аденовирусов человека, при которой количество живых клеток сокращается на 50% (TC50). С этой целью подсчитывали клетки, селективно окрашенные трипановым синим, через 48 ч после добавления соединений. Результаты представлены в табл. 1. В ходе оценки противоаденовирусной активности 5-аминопроизводных урацила клетки линии НЕК293 заражали рекомбинантным аденовирусом человека типа 5, экспрессирующим усиленный зеленый флуоресцентный белок HAdV5-eGFP с множественностью инфекции 1 БОЕ/клетку. Через 3 ч после инфекции добавляли исследуемые соединения в концентрации 25 мкM: этого времени достаточно для завершения начальной стадии инфекционного цикла аденовируса человека (взаимодействия вируса с рецепторами клеточной поверхности и проникновения в клетку). В качестве отрицательного контроля использовали ДМСО. Концентрация ДМСО во всех образцах не превышала 0.1%. Через 24 ч ингибиторную активность соединений оценивали по количеству копий генома HAdV5-еGFP методом количественной ПЦР [23]. Показано, что соединения (1), (3), (4) и (5) проявляют выраженную ингибиторную активность в отношении репликации HAdV5-eGFP (рис. 3). Для соединений (1), (3), (4) и (5), обладающих ингибиторной активностью в отношении аденовирусов человека, была определена концентрация полумаксимального ингибирования (IC50), при которой наблюдается снижение относительного количества копий генома HAdV5-eGFP на 50% по сравнению с контролем. Клетки линии НЕК293 заражали HAdV5-eGFP с множественностью инфекции 1 БОЕ/клетку. Через 3 ч после инфекции добавляли исследуемые соединения в концентрации 0.5, 2.5, 5, 10, 15 и 25 мкM. Концентрация ДМСО во всех образцах не превышала 0.1%. Через 24 ч ингибиторную активность соединений оценивали по количеству копий генома HAdV5-еGFP, которое определяли с помощью количественной ПЦР (рис. 4). Индекс селективности (SI) рассчитывали как отношение TC50 соединения к его IC50 (табл. 1). На основании количественных показателей ингибирования можно судить об эффективности противовирусного действия ряда соединений, т.е. о степени подавления репликации HAdV5-еGFP в культуре клеток НЕК293. Обнаружено, что наибольший противовирусный эффект проявляет 5-(морфолино)-производное (3), IC50 которого составила 0.5 мкМ, а SI = 95. Производные 6-азаурацила оказались либо на порядок менее активны (соединение (1)), либо вообще не проявляли ингибиторных свойств (соединение (2)). Также показано, что введение атома хлора (соединение (4)) или атома фтора (соединение (5)) в пара-положение 4-(фенокси)бензильного фрагмента существенно понижает ингибиторную активность. В то же время замена бензила в 4-(фенокси)бензильном фрагменте на алифатическую цепь привела к получению соединений (6)-(8), у которых полностью отсутствует противоаденовирусное действие. Данный факт свидетельствует о высокой значимости ароматического фрагмента в обеспечении противовирусных свойств исследованного ряда соединений. Кроме того, было оценено влияние наиболее эффективных производных 5-аминоурацила - соединений (1) и (3), на инфекционность аденовирусного потомства HAdV5-eGFP. Наблюдали снижение титра вирусного потомства под воздействием указанных веществ (табл. 2). На основании приведенных данных можно предположить, что механизм действия соединений исследуемого класса связан с ингибированием ключевых факторов репликации аденовирусов человека, таких, как вирусная ДНК-полимераза и продукты гена Е1А [26, 27]. В ходе эксперимента была оценена также выживаемость клеток линии НЕК293, зараженных НAdV5 с множественностью инфекции 10 БОЕ/клетку, в присутствии веществ (1) и (3) (рис. 5). Через 3 ч после заражения к клеткам добавляли растворы соединений (1) и (3) в ДМСО в концентрации 25 мкM. Через 48 ч по данным теста МТТ выживаемость клеток при множественности инфекции 10 БОЕ/клетку составляла 74 и 59% в присутствии веществ (1) и (3) соответственно по сравнению с контролем. Эти данные согласуются с результатами, полученными при аналогичном анализе выживаемости клеток в ходе аденовирусной инфекции (MOI 10 БОЕ/клетку) с использованием резазурина. Так, под действием соединений (1) и (3) доля живых клеток не отличилась статистически значимо от доли в контрольном образце (рис. 5). Полученные данные указывают на наличие противовирусного эффекта у исследуемых соединений. ЗАКЛЮЧЕНИЕ Таким образом, открыт новый тип противоаденовирусных агентов ненуклеозидной природы, которые проявляют ингибирующий эффект в отношении аденовирусов человека. Возможно, соединения данного ряда окажутся перспективными в плане создания на их основе лекарственных средств, эффективных при аденовирусных инфекциях.

Об авторах

Н. А. Никитенко

Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи

Автор, ответственный за переписку.
Email: nanthalia@gmail.com
Россия

Е. С. Гуреева

Волгоградский государственный медицинский университет

Email: nanthalia@gmail.com
Россия

А. А. Озеров

Волгоградский государственный медицинский университет

Email: nanthalia@gmail.com
Россия

А. И. Тухватулин

Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи

Email: nanthalia@gmail.com
Россия

Ф. М. Ижаева

Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи

Email: nanthalia@gmail.com
Россия

В. С. Прасолов

Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН

Email: nanthalia@gmail.com
Россия

П. Г. Дерябин

Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи

Email: nanthalia@gmail.com
Россия

М. С. Новиков

Волгоградский государственный медицинский университет

Email: nanthalia@gmail.com
Россия

Д. Ю. Логунов

Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи

Email: nanthalia@gmail.com
Россия

Список литературы

Дополнительные файлы