Представленность опухоль-инфильтрирующих В-клеток в злокачественных эпителиальных опухолях человека

Обложка

Цитировать

Полный текст

Аннотация

Онкологические заболевания остаются актуальной проблемой глобального здравоохранения. В число ключевых факторов, влияющих на течение заболевания, входят тип злокачественного новообразования и развитие иммунного ответа пациента на опухоль. Важную роль в формировании противоопухолевого ответа играет степень инфильтрации опухоли лимфоцитами, которая коррелирует с благоприятным прогнозом терапии определенных нозологических форм рака. Мы проанализировали представленность опухоль-инфильтрирующих В-клеток (TIB) в солидных опухолях различной нозологии. Показана повышенная представленность TIB в образцах рака ободочной и сигмовидной кишки по сравнению с образцами рака слепой и прямой кишки, а также рака почки. Медианные значения и интерквартильные интервалы доли TIB составляли соответственно 11.5%, 4–20% при раке ободочной кишки, 6%, 3–11% – раке сигмовидной кишки, 2.7%, 0.7–3.7% – раке слепой кишки, 2.5%, 0.9–3.6% – раке прямой кишки, 1.4%, 1.0–2.3% – раке почки и 3.0%, 1.8–12% – раке легкого. В то же время не выявлено достоверных отличий в представленности TIB в образцах рака разной стадии. Полученные результаты представляют особый интерес, указывая на высокий потенциал исследования рака ободочной кишки для поиска потенциальных онкомаркеров, а также изучения противоопухолевого ответа к обнаруженным онкомаркерам. Таким образом, дальнейшее изучение разнообразия TIB в злокачественных опухолях ободочной кишки позволит расширить наши знания о патогенезе и клиническом течении заболевания и будет способствовать идентификации новых молекулярных мишеней для направленной противоопухолевой терапии.

Полный текст

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

КРР – колоректальный рак; НМРЛ – немелкоклеточный рак легкого; ПКР – светлоклеточный почечноклеточный рак; TIB – tumor infiltrated B-cells (опухоль-инфильтрирующие B-клетки).

ВВЕДЕНИЕ

Злокачественные новообразования представляют одну из важнейших медико-социальных проблем. По данным ВОЗ, показатель заболеваемости раком продолжает неуклонно расти. Наиболее распространенными онкозаболеваниями являются рак молочной железы, рак легкого, рак толстой кишки и рак предстательной железы. Несмотря на улучшение качества лечения и новые методы терапии, уровень смертности при некоторых видах опухолей, например, при раке легкого, толстой кишки и печени, остается на очень высоком уровне [1].

Опухоль-инфильтрирующие иммунные клетки играют ключевую роль в развитии иммунного ответа организма на опухоль, они способны проявлять как проопухолевое, так и противоопухолевое действие. Опухоль-инфильтрирующие иммунные клетки представляют собой гетерогенную популяцию, включающую Т-клетки, В-клетки, естественные киллерные (NK) клетки, макрофаги, нейтрофилы, дендритные клетки. Субпопуляционный состав и процентное соотношение иммунных клеток, инфильтрирующих опухоль, могут варьировать в зависимости от вида и стадии рака, а также от пациента к пациенту [2]. Опухоль-инфильтрирующие лимфоциты (TIL) включают Т- и В-клетки, которые вышли из кровотока и мигрировали к опухоли. Присутствие TIL в опухоли может быть прогностическим маркером благоприятного течения заболевания и эффективности терапии [3].

Исследования адаптивного иммунитета в онкоиммунологии в большей степени сосредоточены на CD8+ цитотоксических Т-лимфоцитах (CTL). CTL признаются основными эффекторами противоопухолевого иммунного ответа, они обеспечивают прямое уничтожение трансформированных клеток. Высокий уровень инфильтрации опухоли CTL коррелирует с благоприятным прогнозом течения заболевания и увеличением общей выживаемости пациентов с многими видами рака [4]. CD4+ Т-клетки являются неотъемлемой частью адаптивного иммунитета, но роль, которую они играют в формировании иммунного ответа на опухоль, остается предметом споров [5]. Подобно CD8+ Т-клеткам, существуют опухолеспецифичные CD4+ Т-хелперные клетки (Th), способные распознавать опухолевые антигены и эффективно замедлять рост опухоли в модельных животных в отсутствие CTL [6]. Однако основное противоопухолевое действие CD4+ Тh-клеток заключается в Th-опосредованной активации CTL для распознавания и уничтожения опухолевых клеток или активации других иммунных клеток, включая В-клеточное звено иммунного ответа [7]. В то же время известно, что субпопуляция CD4+ Т-регуляторных лимфоцитов (Treg) напротив оказывает иммуносупрессивное действие в основном за счет продукции цитокинов (IL-10 и TGFβ) и может подавлять противоопухолевую функцию эффекторных клеток микроокружения опухоли, способствуя злокачественному росту и неблагоприятному исходу [8].

Меньше известно о проникающих в опухоль В-клетках, которые часто колокализуются с Т-клетками, иногда образуя организованные лимфоидные структуры [9]. Опухоль-инфильтрирующие В-клетки (TIB) воздействуют на злокачественные новообразования посредством двух противоположных механизмов и могут как способствовать развитию опухоли, так и подавлять ее рост [10]. Противоопухолевое действие В-клеток реализуется различными способами. При развитии гуморального ответа на опухолевые неоантигены В-клетки дифференцируются в плазматические клетки и секретируют опухолеспецифичные антитела, которые опосредуют антителозависимую клеточную цитотоксичность (ADCC), комплементзависимую цитотоксичность (CDC) или антителозависимый клеточный фагоцитоз (ADCP). Помимо продукции антител, В-клетки могут секретировать различные цитокины, влияя на функцию других иммунных клеток в микроокружении опухоли, причем действие может быть разнонаправленным. Так, секреция В-клетками IL-12 опосредует пролиферацию и противоопухолевое действие Т- и NK-клеток, а секреция IL-10 регуляторными В-клетками (Breg), направленная на подавление аутоиммунного ответа, может оказывать проопухолевое действие [11]. Кроме того, В-клетки способны выступать в качестве антигенпрезентирующих клеток (APC), при активации Th2-клеток CD40-лигандом они экспрессируют хемокины и костимулирующие факторы и индуцируют развитие Т-клеточного противоопухолевого иммунного ответа [12]. Таким образом, TIB обладают широким потенциалом для уничтожения опухолевых клеток и оказывают значительное влияние на баланс активации или супрессии других иммунных клеток в микроокружении опухоли.

Наиболее широко TIB изучали при раке молочной железы, где они найдены в 25% случаев и составляют до 40% популяции лимфоцитов, инфильтрирующих опухоль. От представленности TIB при раке молочной железы зависят прогноз выживаемости пациентов и выбор терапии [13]. На данный момент известна положительная корреляция представленности TIB с благоприятным клиническим исходом меланомы [14], рака яичников, немелкоклеточного рака легкого [15], плоскоклеточного рака шейки матки [16, 17].

Цель настоящего исследования состояла в оценке представленности В-лимфоцитов в различных нозологических формах онкологических заболеваний и в анализе ассоциации содержания В-лимфоцитов с клинико-морфологическими характеристиками заболевания.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

В исследование было включено 50 пациентов, проходивших хирургическое лечение в ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России. Злокачественную природу опухоли у всех пациентов клинически верифицировали в рамках планового патоморфологического исследования. В исследование вошли доноры, не получавшие химиотерапию перед проведением оперативного вмешательства. Все пациенты дали информированное согласие на участие в исследовании, работа проведена с соблюдением действующих правовых и этических норм.

Выделение клеток из опухоли

Фрагмент опухоли размером ~ 0.5–2 см3 помещали в 50-мл пробирку с фосфатно-солевым буфером (PBS) сразу после проведения резекции опухоли, дальнейшую работу с материалом начинали в течение 1.5–3 ч после операции. Биологический материал транспортировали в лабораторию при комнатной температуре. Образец осаждали в настольной центрифуге (Eppendorf, Германия) в течение 5 мин (100 g, 24°С). Супернатант декантировали и добавляли 5 мл рабочей среды (смесь сред DMEM F12 и RPMI 1640 («ПанЭко», Россия) в соотношении 1 : 1, 10% бычьей фетальной сыворотки HyClone (Cytiva, США), с добавлением раствора антибиотика-антимикотика (Thermo Fisher Scientific, США) до 1%). Фрагмент опухоли переносили в 60-мм чашку Петри (SPL, Южная Корея) и механически измельчали с использованием медицинского скальпеля № 10 (Apexmed, Индия) на кусочки размером ~ 1–3 мм3. Полученную суспензию переносили в 15-мл пробирку и осаждали в настольной центрифуге (Eppendorf) в течение 5 мин (100 g, 24°С). Супернатант декантировали и добавляли 2 мл теплой рабочей среды, содержащей смесь ферментов: 0.5 мг ДНКазы I (Sigma, США), по 1 мг коллагеназы I и IV типов (Merсk, США) и 2 мг гиалуронидазы (Microgen, Россия). Пробирку с фрагментами ткани помещали на вращающуюся платформу (Biosan, Латвия) и инкубировали в течение 40 мин при 7 об/мин в СО2-инкубаторе при температуре 37°С и 8% СО2. По окончании инкубации раствор с клетками аккуратно перемешивали 25–50 раз с использованием серологической пипетки для разрушения агрегатов до получения однородной суспензии. Клеточную суспензию последовательно фильтровали через клеточные сита с размером пор 100, 70 и 40 мкм, каждый раз дополнительно промывая использованное сито 2 мл рабочей среды. Клетки осаждали в настольной центрифуге (Eppendorf) в течение 15 мин (300 g, 24°С). Клеточный осадок обрабатывали 1 мл AСK-буфера (150 мМ хлорид аммония; 10 мМ бикарбонат калия; 0.1 мМ EDТА-Na2) в течение 1 мин для лизиса эритроцитов в случае необходимости, реакцию останавливали 2 мл рабочей среды. Клетки осаждали в настольной центрифуге (Eppendorf) в течение 7 мин (300 g, 24°С). Супернатант декантировали, клеточный осадок ресуспендировали в 2 мл культуральной среды (DMEM advanced 90% (Thermo Fisher Scientific), бычья фетальная сыворотка HyClone 10% (Cytiva, США), L-аланил-L-глутамин (Yeasen, CША) до 2 мМ, антибиотик-антимикотик (Thermo Fisher Scientific) до 1%) и оценивали число жизнеспособных клеток методом исключения красителя трипановый синий с использованием автоматического счетчика клеток CellDrop FL (DeNovix, США). Часть полученных клеток окрашивали с последующим цитометрическим анализом, оставшуюся часть клеток подвергали криоконсервации в среде КриоМед-М («ПанЭко») согласно инструкции производителя.

Оценка количества В-лимфоцитов с использованием проточной цитофлуориметрии

Диссоциированные клетки опухоли (2 млн) осаждали в настольной центрифуге (Eppendorf) в течение 5 мин (350 g, 4°С). Среду декантировали, клеточный осадок ресуспендировали в 100 мкл фосфатно-солевого буфера с добавлением 0.5% БСА и 2 мМ EDТА. Окрашивание проводили с использованием моноклонального антитела мыши (клон 2D1) против общего лейкоцитарного антигена CD45 человека, конъюгированного с флуоресцентной меткой АРС-Сy7 (Sony, США), в разведении 1 : 300 и моноклонального антитела мыши (клон HIB19) против В-лимфоцитарного антигена CD19 человека, конъюгированного с флуоресцентной меткой PE-Cy7 (BioLegend, США), в разведении 1 : 1000. Инкубацию с антителами проводили в течение 30 мин в темноте при температуре 4°С. Для идентификации мертвых клеток добавляли краситель SYTOX Green (BioLegend, США) в разведении 1 : 3000 и инкубировали дополнительно в течение 15 мин в темноте при 4°С. Далее образец троекратно отмывали 500 мкл фосфатно-солевого буфера с добавлением 2 мМ EDТА и ресуспендировали в 100 мкл для анализа окрашивания с помощью проточного цитофлуориметра ACEA Novocyte (ACEA Biosciences, США). Статистическую обработку данных проводили с использованием инструментов Python (seaborn, pandas). Оценивали значения медианы в каждой исследуемой группе, решение о достоверности различий, наблюдаемых между рассматриваемыми выборками, принимали на основании непараметрического U-критерия Манна–Уитни.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

В исследование включено 50 больных злокачественными новообразованиями различных нозологий: КРР (n = 31), НМРЛ (n = 13) и ПКР (n = 6). Выделение клеток из опухолевого материала проводили по протоколу [18] с некоторыми модификациями. Финальная схема получения гомогенной суспензии клеток включала механическое измельчение образца, диссоциацию фрагментов ткани с использованием смеси ферментов и три последовательных этапа фильтрации через клеточные сита с размером пор 100, 70 и 40 мкм (рис. 1).

 

Рис. 1. Схема диссоциации опухолевой ткани

 

Механическая диссоциация включает измельчение фрагмента опухоли с помощью медицинского скальпеля на небольшие кусочки для увеличения площади контакта ткани с ферментами на следующей стадии. Для разрушения внеклеточного матрикса и получения суспензии клеток опухоли применяют ферментативную диссоциацию с использованием ферментов, обладающих коллагеназной, гликозидазной и протеолитической активностью. Тип ферментов, используемых для диссоциации, может значительно влиять на количественный выход и показатель жизнеспособности получаемых клеток. В ходе исследования была подобрана оптимальная комбинация ферментов, состоящая из гиалуронидазы, ДНКазы I, коллагеназы I и IV типов (1.0; 0.25, 0.5 и 0.5 мг/мл соответственно; см. «Экспериментальную часть»), использование которой приводит к эффективному разрушению клеточных контактов. Эта комбинация позволила нам сократить продолжительность стадии ферментативной диссоциации до 30–40 мин и повысить выход жизнеспособных клеток до 80% и более. Фильтрование полученной суспензии необходимо для дальнейшей дезагрегации препарата клеток, при этом использование клеточного сита с размером пор 100 мкм позволило эффективно удалять крупные клеточные конгломераты, жировую фракцию и облегчило дальнейшее фильтрование образца через сита с размером пор 70 и 40 мкм для получения гомогенной суспензии клеток. Таким образом, использование сочетания механической и ферментативной диссоциации опухолевой ткани позволило получить однородную суспензию клеток с высоким уровнем жизнеспособности, составляющим в среднем 88%.

 

Рис. 2. Стратегия последовательного гейтирования при оценке доли опухоль-инфильтрирующих В-клеток. А – овальной областью выделены клетки, соответствующие по показателям бокового и прямого светорассеяния популяции клеток из опухоли. Б – овальной областью выделены одиночные клетки. B – прямоугольной областью выделена популяция живых клеток. Г – изображение поделено на квадранты, соответствующие субпопуляциям клеток CD45-/CD19-, CD45-/CD19+, CD45+/CD19- и CD45+/CD19+. Субпопуляция клеток CD45+/CD19+ соответствует В-клеткам

 

Для идентификации и количественной оценки популяции В-клеток, отражающей степень инфильтрации опухолевой ткани, все образцы были проанализированы с помощью проточной цитометрии (рис. 2). Окрашивание проводили с использованием моноклональных антител против общего лейкоцитарного антигена CD45 человека, конъюгированного с флуоресцентной меткой АРС-Сy7 (CD45 APC-Cy7), и антител к В-лимфоцитарному антигену CD19 человека, конъюгированному с флуоресцентной меткой PE-Cy7 (CD19 РЕ-Cy7). На первом этапе на точечной диаграмме FSC (прямое светорассеяние) против SSC (боковое светорассеяние) идентифицировали популяцию клеток из опухоли (рис. 2А), далее отделяли одиночные клетки от клеточных агрегатов, способных давать завышенное значение флуоресцентного сигнала при дальнейшем определении количества В-клеток (рис. 2Б). На втором этапе проводили гейтирование живых клеток среди одиночных клеток (рис. 2В) по окрашиванию флуоресцентным красителем SytoxGreen, высокоаффинным к нуклеиновым кислотам. Краситель проникает только в клетки с поврежденными плазматическими мембранами, поэтому его используют для оценки жизнеспособности клеток. Затем среди живых клеток выделяли четыре субпопуляции в соответствии с окрашиванием специфическими антителами к поверхностным антигенам CD45 и CD19, где В-клеткам соответствует гейт с двойным положительным окрашиванием (рис. 2Г).

 

Рис. 3. А – оценка количества опухоль-инфильтрирующих В-клеток в опухолевом материале различной нозологии. Б – представленность опухоль-инфильтрирующих В-клеток в образцах рака ободочной кишки в зависимости от стадии. Статистический анализ проведен с использованием непараметрического U-критерия Манна–Уитни. *p < 0.05; NS – нет достоверного отличия

 

Аналогичным образом были проанализированы образцы клеток образцов всех исследуемых нозологий, содержание количества CD19+ В-клеток значительно варьировало от 0.4 до 40% (рис. 3А).

Наибольшее процентное содержание TIB наблюдалось у пациентов с раком ободочной и сигмовидной кишки, медиана значений по группе составила 11.5 и 6% соответственно (p < 0.05). Для остальных групп (рак слепой и прямой кишки, рак легкого) медианное значение доли В-клеток составляло около 3%. Самое низкое содержание доли В-клеток зафиксировано при раке почки – медиана составила 1%.

Интерквартильные интервалы доли TIB составляли, соответственно, 4–20% при раке ободочной кишки, 3–11% – раке сигмовидной кишки, 0.7–3.7% – раке слепой кишки, 0.9–3.6% – раке прямой кишки, 1.0–2.3% – раке почки и 1.8–12% – раке легкого.

Проведен анализ представленности TIB в образцах рака ободочной кишки в зависимости от стадии заболевания (рис. 3Б).

Полученные результаты не выявили статистически значимых различий в процентном содержании TIB на разных стадиях опухолей.

Обобщенный анализ содержания В-лимфоцитов при КРР и клинико-морфологических характеристик заболевания представлен в табл. 1.

 

Таблица 1. Ассоциация содержания В-клеток при колоректальном раке с клинико-морфологическими характеристиками опухоли

Характеристика

n

CD19+ В-клетки, %

медиана

квартили

2575%

p

Возраст

≤63

>63

 

15

16

 

7.0

3.3

 

3.5–15.0

2.1–14.5

 

0.428

Пол/Gender

Мужской/male

Женский/female

 

14

17

 

7.0

3.5

 

3.5–20.0

2.3–8.5

 

0.135

Стадия/Stage

I–II

III–IV

 

18

13

 

6.0

3.5

 

1.8–16.3

2.8–12.0

 

0.805

Степень дифференцировки опухоли (G)/Grade

G1

G2–G3

 

4

27

 

3.8

15.0

 

2.1–9.5

6.0–20.0

 

0.175

Размер опухоли (T)/Tumor size

T1–T2

T3–T4

 

20

11

 

1.9

6.0

 

0.2–3.1

3.0–16.0

 

0.019*

Наличие регионарных метастазов (N)/Nodal status

N0

N1

 

29

2

 

5.15

4.0

 

2.0–13.8

3.0–16.0

 

0.707

Наличие отдаленных метастазов (M)/Metastasis

M0

M1

 

28

3

 

4.3

6.0

 

2.3–15.5

4.0–8.0

 

0.727

Локализация

толстая кишка

прямая кишка

 

27

4

 

6.0

3.25

 

2.5–16.0

2.3–3.9

 

0.255

Отдел толстой кишки

левый

правый

 

14

13

 

5.15

8.0

 

1.7–9.3

2.8–18.5

 

0.296

 

Выявлена прямая корреляция между количеством В-клеток и размером опухоли, а именно, опухоли большего размера характеризуются большим содержанием В-клеток. Также стоит отметить, что низкодифференцированные опухоли характеризуются большим содержанием В-клеток, однако эти результаты не достигали статистической значимости.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

По данным 2020 года, в мире зарегистрировано 1.9 млн новых случаев колоректального рака. По некоторым оценкам, в России ежегодное увеличение составляет около 50 тысяч новых случаев в год. Колоректальный рак достаточно поздно выявляется, поэтому летальность от него довольно высока и достигает 40% в течение года с момента обнаружения опухоли [19] и, по данным Всемирной организации здравоохранения, он является второй по значимости причиной смерти от рака во всем мире [20]. В связи с этим поиск терапевтически значимых онкоспецифических антигенов и/или терапевтических антител к ним становится важнейшей задачей.

Полученные в ходе исследования данные позволяют расширить знания о представленности TIB в различных нозологических формах онкологических заболеваний. Установлено, что рак ободочной кишки характеризуется наибольшим процентным содержанием TIB. Забор материала для исследований можно проводить независимо от стадии заболевания, поскольку не выявлено достоверных различий в представленности В-клеток на разных стадиях прогрессии опухолей. Однако есть противоречивые данные, что количество TIB при колоректальном раке зависит от стадии развития опухоли [21]. Известно также, что число внутриопухолевых В-клеток обратно коррелирует со стадией рака легкого [22].

С фундаментальной точки зрения глубокое профилирование TIB расширяет знания о закономерностях иммунного ответа на раковые клетки и откроет новые возможности для поиска потенциальных маркеров злокачественной трансформации. С практической точки зрения опухоль-инфильтрирующие В-клетки можно использовать для создания библиотек антител с целью дальнейшей разработки CAR-T-терапии и других подходов персонализированной терапии.

 

Исследование поддержано совместным грантом РНФ № 23-44-00043 и грантом Национального фонда естественных наук Китая 82261138553.

×

Об авторах

Е. А. Петров

Государственный научный центр Российской Федерации Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН

Email: ivansmr@inbox.ru
Россия, Москва, 117997

Д. М. Малабуйок

Государственный научный центр Российской Федерации Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН

Email: ivansmr@inbox.ru
Россия, Москва, 117997

Х. Чжeнг

State Key Laboratory of Medicinal Chemical Biology and College of Life Sciences, Nankai University

Email: ivansmr@inbox.ru
Китай, 94 Weijin Road, Tianjin, 300071

Ю. А. Мокрушина

Государственный научный центр Российской Федерации Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН; Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова

Email: ivansmr@inbox.ru
Россия, Москва, 117997; Москва, 119991

В. А. Абрикосова

Государственный научный центр Российской Федерации Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН

Email: ivansmr@inbox.ru
Россия, Москва, 117997

Ю. Б. Кузьмин

НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина Минздрава России

Email: ivansmr@inbox.ru
Россия, Москва, 115522

П. В. Царапаев

НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина Минздрава России

Email: ivansmr@inbox.ru
Россия, Москва, 115522

С. О. Кочкина

НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина Минздрава России

Email: ivansmr@inbox.ru
Россия, Москва, 115522

И. В. Ельцов

НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина Минздрава России

Email: ivansmr@inbox.ru
Россия, Москва, 115522

В. Д. Кнорре

Государственный научный центр Российской Федерации Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН

Email: ivansmr@inbox.ru
Россия, Москва, 117997

И. В. Смирнов

Государственный научный центр Российской Федерации Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН; Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова; НМИЦ эндокринологии Минздрава России

Автор, ответственный за переписку.
Email: ivansmr@inbox.ru
Россия, Москва, 117997; Москва, 119991; Москва, 117292

С. С. Терехов

Государственный научный центр Российской Федерации Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН

Email: ivansmr@inbox.ru
Россия, Москва, 117997

З. З. Мамедли

НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина Минздрава России

Email: ivansmr@inbox.ru
Россия, Москва, 115522

Н. Е. Кушлинский

НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина Минздрава России

Email: ivansmr@inbox.ru
Россия, Москва, 115522

Д. В. Рогожин

НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина Минздрава России

Email: ivansmr@inbox.ru
Россия, Москва, 115522

В. Б. Матвеев

НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина Минздрава России

Email: ivansmr@inbox.ru
Россия, Москва, 115522

П. В. Кононец

НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина Минздрава России

Email: ivansmr@inbox.ru
Россия, Москва, 115522

И. С. Стилиди

НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина Минздрава России

Email: ivansmr@inbox.ru
Россия, Москва, 115522

Х. Чжанг

State Key Laboratory of Medicinal Chemical Biology and College of Life Sciences, Nankai University

Email: ivansmr@inbox.ru
Китай, 94 Weijin Road, Tianjin, 300071 China

А. Г. Габибов

Государственный научный центр Российской Федерации Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН; Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова

Email: ivansmr@inbox.ru
Россия, Москва, 117997; Москва, 119991

Список литературы

  1. Всемирная организация здравоохранения. Официальный сайт ВОЗ. Доступно по: https://www.who.int/
  2. Kim S., Kim A., Shin J.Y., Seo J.S. // Sci. Rep. 2020. V. 10. № 1. P. 9536.
  3. Brummel K., Eerkens A.L., de Bruyn M., Nijman H.W. // Br. J. Cancer. 2023. V. 128. № 3. P. 451–458.
  4. Yu P., Fu Y.X. // Lab. Investig. J. Tech. Methods Pathol. 2006. V. 86. № 3. P. 231–245.
  5. Tay R.E., Richardson E.K., Toh H.C. // Cancer Gene Ther. 2021. V. 28. № 1–2. P. 5–17.
  6. Perez-Diez A., Joncker N.T., Choi K., Chan W.F., Anderson C.C., Lantz O., Matzinger P. // Blood. 2007. V. 109. № 12. P. 5346–5354.
  7. Fearon E.R., Pardoll D.M., Itaya T., Golumbek P., Levitsky H.I., Simons J.W., Karasuyama H., Vogelstein B., Frost P. // Cell. 1990. V. 60. № 3. P. 397–403.
  8. Pati S., Chowdhury A., Mukherjee S., Guin A., Mukherjee S., Sa G. // Appl. Cancer Res. 2020. V. 40. № 1. P. 7.
  9. Sharonov G.V., Serebrovskaya E.O., Yuzhakova D.V., Britanova O.V., Chudakov D.M. // Nat. Rev. Immunol. 2020. V. 20. № 5. P. 294–307.
  10. Zhang E., Ding C., Li S., Zhou X., Aikemu B., Fan X., Sun J., Zheng M., Yang X. // Biomark. Res. 2023. V. 11. № 1. P. 28.
  11. Li Q., Teitz-Tennenbaum S., Donald E.J., Li M., Chang A.E. // J. Immunol. 2009. V. 183. № 5. P. 3195–3203.
  12. Guo F.F., Cui J.W. // J. Oncol. 2019. V. 2019. P. 2592419.
  13. Marsigliante S., Biscozzo L., Marra A., Nicolardi G., Leo G., Lobreglio G.B., Storelli C. // Cancer Lett. 1999. V. 139. № 1. P. 33–41.
  14. Willsmore Z.N., Harris R.J., Crescioli S., Hussein K., Kakkassery H., Thapa D., Cheung A., Chauhan J., Bax H.J., Chenoweth A., et al. // Front. Immunol. 2021. V. 11. P. 622442.
  15. Federico L., McGrail D.J., Bentebibel S.E., Haymaker C., Ravelli A., Forget M.A., Karpinets T., Jiang P., Reuben A., Negrao M.V., et al. // Ann. Oncol. Off J. Eur. Soc. Med. Oncol. 2022. V. 33. № 1. P. 42–56.
  16. Reuschenbach M., von Knebel Doeberitz M., Wentzensen N. // Cancer Immunol. Immunother. 2009. V. 58. № 10. P. 1535–1544.
  17. Coronella-Wood J.A., Hersh E.M. // Cancer Immunol. Immunother. 2003. V. 52. № 12. P. 715–738.
  18. Leelatian N., Doxie D.B., Greenplate A.R., Sinnaeve J., Ihrie R.A., Irish J.M. // Curr. Protoc. Mol. Biol. 2017. V. 118. P. 25C.1.1–25C.1.23.
  19. Avksentyeva M. // Eur. J. Health Econ. HEPAC Health Econ. Prev Care. 2010. V. 10. Suppl 1. P. S91–98.
  20. Всемирная организация здравоохранения. Официальный сайт ВОЗ. Доступно по: https://www.who.int/ru/news-room/fact-sheets/detail/colorectal-cancer.
  21. Bindea G., Mlecnik B., Tosolini M. // Immunity. 2013. V. 39. № 4. P. 782–795.
  22. Gottlin E.B., Bentley R.C., Campa M.J., Pisetsky D.S., Herndon J.E., Patz E.F. // J. Thorac. Oncol. Off Publ. Int. Assoc. 2011. V. 6. № 10. P. 1687–1690.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
2. Рис. 1. Схема диссоциации опухолевой ткани

Скачать (689KB)
3. Рис. 2. Стратегия последовательного гейтирования при оценке доли опухоль-инфильтрирующих В-клеток. А – овальной областью выделены клетки, соответствующие по показателям бокового и прямого светорассеяния популяции клеток из опухоли. Б – овальной областью выделены одиночные клетки. B – прямоугольной областью выделена популяция живых клеток. Г – изображение поделено на квадранты, соответствующие субпопуляциям клеток CD45-/CD19-, CD45-/CD19+, CD45+/CD19- и CD45+/CD19+. Субпопуляция клеток CD45+/CD19+ соответствует В-клеткам

Скачать (966KB)
4. Рис. 3. А – оценка количества опухоль-инфильтрирующих В-клеток в опухолевом материале различной нозологии. Б – представленность опухоль-инфильтрирующих В-клеток в образцах рака ободочной кишки в зависимости от стадии. Статистический анализ проведен с использованием непараметрического U-критерия Манна–Уитни. *p < 0.05; NS – нет достоверного отличия

Скачать (369KB)

© Петров Е.А., Малабуйок Д.М., Чжeнг Х., Мокрушина Ю.А., Абрикосова В.А., Кузьмин Ю.Б., Царапаев П.В., Кочкина С.О., Ельцов И.В., Кнорре В.Д., Смирнов И.В., Терехов С.С., Мамедли З.З., Кушлинский Н.Е., Рогожин Д.В., Матвеев В.Б., Кононец П.В., Стилиди И.С., Чжанг Х., Габибов А.Г., 2024

Creative Commons License
Эта статья доступна по лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License.

Данный сайт использует cookie-файлы

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, которые обеспечивают правильную работу сайта.

О куки-файлах