Возможная функция гена ribT Bacillus subtilis: теоретическое предсказание, клонирование и экспрессия

Полная расшифровка функций и взаимодействия элементов оперона биосинтеза рибофлавина (rib-оперон) у Bacillus subtilis необходима для создания сверхпродуцентов этого важнейшего витамина. Функция гена ribT, замыкающего оперон, до сих пор не определена. В представленной работе проведен поиск гомологов гипотетической аминокислотной последовательности продукта этого гена в базах данных, а также анализ гомологий, теоретически предсказано распределение элементов вторичной структуры, предложена третичная структура белка RibT. Нуклеотидная последовательность гена ribT была амплифицирована и клонирована в стандартный мультикопийный экспрессионный вектор pET15b, а затем экспрессирована после индукции ИПТГ в клетках Escherichia coli BL21(DE3), содержавших индуцибельный ген РНК-полимеразы фага Т7. Экспрессия гена ribT подтверждена электрофорезом в полиакриламидном геле в денатурирующих условиях (SDS-PAGE). Белковый продукт экспрессии очищен с помощью аффинной хроматографии. Таким образом, показана принципиальная возможность получения белка RibT в количествах, достаточных для дальнейшего изучения его структуры и функциональной активности.