Рекомбинантная α-N-ацетилгалактозаминидаза морской бактерии, модифицирующая детерминанты А-эритроцитов

На основе pET-40b сконструирована плазмида, определяющая синтез рекомбинантной α-N-ацетилгалактозаминидазы морской бактерии Arenibacter latericius KMM 426Т (α-AlNaGal) в клетках Escherichia coli. В условиях экспрессии при температуре 16оС, концентрации индуктора 0.2 мМ и культивирования в течение 12 ч выход α-AlNaGal достигает 10 мг/л с общей активностью 49.7 ± 1.3 U. Разработаны процедуры очистки α-AlNaGal с использованием анионообменной, металлоаффинной хроматографии и гель-фильтрации. α-AlNaGal представляет собой гомодимер с молекулярной массой 164 кДа, стабильна до 50°С с температурным оптимумом реакции при 20-37°С, и ее активность не зависит от присутствия ионов металлов в инкубационной среде. Методом Н-ЯМР-спектроскопии показано, что α-AlNaGal катализирует гидролиз О-гликозидной связи с сохранением стереохимической конфигурации аномерного атома и реализует механизм, характерный для семейства 109 гликозидгидролаз. α-AlNaGal снижает серологическую активность А-эритроцитов при рН 7.3, что делает ее в перспективе пригодной для конверсии А- и АВ- эритроцитов в эритроциты группы крови О.