Дериватизация аминогликозидных антибиотиков трис(2,6-диметоксифенил)метилием

Полный текст

ВВЕДЕНИЕ Аминогликозиды представляют собой класс бактери цидных антибиотиков (преимущественно активных в отношении аэробной грамотрицательной микро биоты, высокоэффективных при большинстве тя желых инфекций (туберкулез, эндокардит, сепсис)) [1]. Действие аминогликозидов не зависит от фазы размножения микроорганизма, они необратимо свя зываются с белками 30S субъединицы бактериаль ных рибосом, нарушая тем самым синтез белка в них. Однако необходимость аэробных условий делает их применение менее эффективным в плохо снабжае мых кровью и омертвевших тканях. Еще одним фак тором, влияющим на бактерицидную активность аминогликозидов, оказывается рН среды - в кислой и нейтральной средах они менее эффективны, чем в слабощелочной среде. Главным недостатком этой группы лекарств является их высокая ото- и нефро токсичность [2, 3] по сравнению с другими антибиоти ками, что требует проведения постоянного контроля их содержания не только в биологических жидко стях, но и в продуктах питания животного проис хождения. За несколько десятилетий использования этих антибиотиков в клинической медицине разрабо тано большое число лабораторных методов детекции аминогликозидов (с использованием ГХ-МС, ВЭЖХ, в том числе с дериватизацией, ИФА, капиллярного электрофореза и т.п.). Совсем недавно опубликованы два достаточно подробных обзора по этой тематике [4, 5]. Большое число публикаций [6-18] свидетель ствует об актуальности проблемы и необходимости поиска удобных, простых и быстрых процедур, по скольку большинство существующих оказываются либо трудоемкими и долгими, либо предполагают ис пользование дорогостоящих реагентов. Молекулы аминогликозидных антибиотиков, как правило, содержат несколько аминогрупп (рис. 1). Помимо аминогрупп, непосредственно свя занных с гетероциклом или алициклом, молекулы со держат аминогруппы, связанные с первичным ато мом углерода (выделены красным цветом). Другая особенность аминогликозидов - прозрачность их рас творов в УФ-диапазоне, поскольку в их молекулах отсутствуют сопряженные связи или ароматические фрагменты. Поэтому их невозможно анализировать с помощью ВЭЖХ с УФ-детектором. Обилие гидрок сильных групп и аминогрупп, способных образовы вать водородные связи, затрудняет высвобождение индивидуальных молекул, что сильно снижает эф фективность ионизации аминогликозидов в масс спектрометрии, например, по сравнению с пептидами близкой массы. Кроме того, обнаружение аминогли козидов в МАЛДИ масс-спектрометрии может ос ложняться попаданием сигналов вещества в область «шумов» матрицы. Недавно нами был разработан мягкий метод де риватизации низкомолекулярных аминов реакцией с катионом трис(2,6-диметоксифенил)метилия 1 [19]. Образующиеся производные 9,10-дизамещенного акридиниевого катиона (Q+-R) обладают перманент ным положительным зарядом (рис. 2). В результате дериватизации происходит также увеличение массы молекулы на постоянную величину (инкремент мас сы +359 Да), что позволяет успешно детектировать методом масс-спектрометрии МАЛДИ амины даже самой малой массы [19]. В то же время модификация гидрофильных алифатических молекул гидрофоб ным ароматическим катионом Q+ может иметь пер спективы с точки зрения обращенно-фазовой ВЭЖХ с УФ-детекцией. Представляло интерес выяснить применимость этого метода для определения данного класса лекар ственных препаратов. В настоящей работе представ лен качественный метод обнаружения дериватизи рованных неотщепляемой масс-спектрометрической меткой аминогликозидных антибиотиков с помощью масс-спектрометрии и ВЭЖХ. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ Материалы В работе использовали следующие растворители: диметилсульфоксид, ацетонитрил (Panreac), осталь ные растворители - отечественного производства («Химмед» и «ЭКОС-1») квалификации «х. ч.» (гек сан, метанол, дихлорметан, этилацетат, хлороформ, этанол) и «ос. ч.» (толуол, ацетон). Дихлорметан перегоняли над гидридом кальция, ДМФА пере гоняли над гидридом кальция в вакууме и хранили над молекулярными ситами 3Å. Реактивы и сорбен ты: триэтиламин, 1,3-диметоксибензол, н-бутиламин (Sigma-Aldrich-Fluka, США), аминогликозид ные антибиотики канамицин (ОАО «Биохимик», г. Саранск, Россия), сисомицин, тобрамицин, паромо мицин (Минхимпром СССР), алюминиевые пластины для тонкослойной хроматографии со слоем силика геля (Kieselgel 60 F254) или оксида алюминия, силика гель и оксид алюминия (активность I) для колоночной хроматографии (Merck, США). Оборудование и условия 1D и 2D (COSY, HMBC, HSQC) спектры ЯМР реги стрировали при 500 МГц (1H), 125.7 МГц (13C) на спек трометре Bruker AC-500. Спектры калиброваны по остаточным сигналам протонов растворителя, DMSO-d6 (δH 2.50 м.д. и δC 39.7 м.д.) или CD3СN (δH 1.94 м.д. для 1H и δC 1.32 м.д.); химические сдвиги при ведены относительно SiMe4 (1H и 13C). Визуализацию ТСХ-пластин проводили с помощью ультрафио летовой лампы при 254 и 360 нм. Масс-спектры ре гистрировали с использованием времяпролетного масс-анализатора Ultraflex II TOF/TOF (Bruker Daltonics, Германия), оснащенного азотным лазером (длина волны 337 нм), работающим при частоте 50 Гц в режиме регистрации положительно заряженных ионов с применением рефлектрона. Анализ и пре паративное разделение модифицированных амино гликозидных антибиотиков проводили с помощью ОФ-ВЭЖХ в градиенте ацетонитрила на хромато графе Agilent Technologies 1200 Series на обращен но-фазовой колонке Synergi Polar RP (4.5 × 250 мм) в следующих условиях: скорость потока 0.9 мл/мин, 15-50% 80% MeCN + 0.1% TFA за 30 мин, 50-70% за 20 мин, 70-90% за 10 мин, 90% за 5 мин, изократич. в течение 5 мин. Поглощение определяли при 285 нм. Анализ конверсии соединения (1) в соединение (2) проводили с помощью ВЭЖХ в градиенте ацетони трила на хроматографе Agilent 1100 Series с муль тиволновым детектором на основе диодной матрицы на обращенно-фазовой колонке Symmetry C8, Waters в следующих условиях: скорость потока 1 мл/мин, градиент ацетонитрила - от 50 до 70% за 20 мин, от 70 до 98% за 10 мин. Для проведения дериватизации, растворения аналитов и матричных соединений использова ли ацетонитрил (HPLC-grade, J.T. Baker), мета нол (HPLCgrade, Merck), хлороформ (HPLC-grade, Merck), ультрачистую воду типа I, полученную с ис пользованием системы Milli-Q (Millipore). В каче стве матриц применяли 2,5-дигидроксибензойную, синапиновую и 1-циано-4-гидроксикоричную кис лоты (раствор 20 мг/мл в ацетонитриле с добавкой 0.1% трифторуксусной кислоты). Раствор образца (0.5 мкл) в смеси с раствором матрицы (0.5 мкл) наносили в лунку стальной мишени (MTP 384 massive target gold plate T, Bruker Daltonics, Германия) и высуши вали на воздухе. Гексафторфосфат трис(2,6-диметоксифенил) карбения (1) [20-22] К раствору 1,3-диметоксибензола (10.0 г, 72.4 ммоль) в 100 мл тетрагидрофурана при перемешивании в атмосфере аргона и охлаждении до -20оС прибав ляли по каплям 2.5 М раствор н-бутиллития (30 мл, 76 ммоль). Через 1 ч медленно добавляли раствор ди этилкарбоната (2.85 г, 24 ммоль) в тетрагидрофуране (10 мл) и перемешивали при комнатной температу ре в течение 1 сут. Растворитель удаляли при по ниженном давлении. К остатку при перемешивании добавляли 200 мл диэтилового эфира, 50 мл дихлор метана и 30 мл HPF6. Через 3 ч растворитель уда ляли при пониженном давлении, затирали в 300 мл диэтилового эфира и отделяли выпавшие фиолето вые кристаллы. Получали 31.0 г (76%) соединения 1. 1H-ЯМР-спектр (СD3CN, δН, м. д.): 3.55 (м, 18Н, ОСН3), 6.61 (6д, 6Н, J 8.54 Гц), 7.63 (3т, 3Н, J 8.54 Гц). Масс спектр (МАЛДИ, m/z, CHCA): 423.15. Гексафторфосфат 1,8-диметокси-9-(2,6 диметоксифенил)-10-(бутил)акридиния (2) К раствору гексафторфосфата трис(2,6-диметоксифенил) метилия (1) (1.0 г, 1.76 ммоль) в ацетонитриле (15 мл) при перемешивании при комнатной темпе ратуре в атмосфере аргона добавляли н-бутиламин (350 мкл, 3.52 ммоль). Цвет раствора изменялся от фиолетового к красному. Через 1 ч растворитель удаляли при пониженном давлении, твердый осадок затирали в диэтиловом эфире, образовавшийся крас ный осадок отфильтровывали и сушили в эксикаторе при пониженном давлении. Получали 1.0 г соедине ния 2 (98%). 1H-ЯМР-спектр (СD3CN, δН, м. д.): 1.15 (т, 3H, J 7.3 Гц, Н-4′′), 1.73-1.80 (м, 2H, Н-3′′), 2.16-2.22 (м, 2H, Н-2′′), 3.57 (с, 6H, OCH3), 3.59 (с, 6H, OCH3), 5.06- 5.09 (м, 2H, Н-1′′), 6.81 (д, 2H, J 8.5 Гц, H-3′, H-5′), 7.12 (д, 2H, J 8.2 Гц, Н-2, Н-7), 7.45-7.48 (м, 1H, Н-4′), 7.93 (д, 2H, J 9.2 Гц, Н-4, Н-5), 8.20-8.24 (м, 2H, Н-3, Н-6). 13С-ЯМР-спектр (СD3CN, δС, м. д.): 12.96 (4′′), 19.61 (3′′), 29.52 (2′′), 52.37 (1′′), 55.64 (OCH3), 56.76 (OCH3), 103.74 (3′, 5′), 106.50 (2, 7), 109.26 (4, 5), 119.67 (1′), 119.89 (9), 129.40 (4′), 139.87 (3, 6), 141.61 (1, 8), 155.79 (2′, 6′), 157.18 (8a, 9a), 160.58 (4a, 10a). Масс-спектр (МАЛДИ, m/z, CHCA): 432.30. Общая методика получения конъюгатов гексафторфосфата трис(2,6-диметоксифенил) метилия с аминоуглеводами (аминоглюцитолом, тобрамицином, паромомицином, сисомицином) К 150 мкл 0.5 × 10-2 М раствора гексафторфосфата трис(2,6-диметоксифенил)метилия в ацетонитри ле добавляли 1 экв. соответствующего аминоу глевода в 200 мкл карбонатного буфера (рН 9.55). Реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин при комнатной температуре. Анализ конъюгатов проводили прямо из реакционной смеси без допол нительной очистки. Гексафторфосфат 1,8-диметокси-9-(2,6 диметоксифенил)-10-(6′-дезазаканамицин-6′-ил) акридиния (3) К раствору сульфата канамицина ( 7.8 мг, 0.015 ммоль) в 2 мл буферного раствора (рН 9.55) при пере мешивании добавляли 2.8 мг (0.005 ммоль) гексаф торфосфата трис(2,6-диметоксифенил)метилия (1) в ацетонитриле. Реакционную смесь выдерживали в течение 30 мин и очищали с помощью препаратив ной ВЭЖХ. Получали 10.9 мг соединения (3) (74%). 1H-ЯМР-спектр (DMSO-d6, δН, м. д.): 1.69-1.72 (м, 1Н, Н-2), 2.31-2.33 (м, 1Н, Н-2), 3.17-3.22 (м, 1Н, Н-3′′), 3.36 (м, 1Н, Н-2′), 3.38 (м, 1Н, Н-1/Н-3), 3.40 (м, 1Н, Н-4′), 3.45 (м, 1Н, H-1/Н-3), 3.48 (м, 3Н, OCH3), 3.50 (м, 6Н, OCH3), 3.51 (м, 1Н, Н-3′), 3.52 (м, 1Н, Н-6′′), 3.53 (м, 1Н, Н-4′′), 3.56 (м, 3Н, OCH3), 3.57 (м, 1Н, Н4/6), 3.60 (м, 1Н, Н-6′′), 3.66 (м, 1Н, Н4/6), 3.68 (м, 1Н, Н-2′′), 3.73 (м, 1Н, Н-5), 3.76 (м, 1Н, Н-5′′), 4.57-4.60 (м, 1Н, Н-5′), 4.74 (c, 1Н, OН), 5.03 (д, J 3.7 Гц, 1Н, Н-1′′), 5.26 (с, 1Н, ОН), 5.32 (м, 1Н, Н-1′), 5.35 (м, 1Н, Н-6′), 5.55 (м, 1Н, Н-6′), 6.49 (м, 1Н, ОН), 6.79-6.83 (м, 2Н, Н-3′′′′, Н-5′′′′), 6.91 (с, 1Н, ОН), 7.17 (м, 1Н, Н-2′′′), 7.20 (м, 1Н, Н-7′′′), 7.42-7.45 (т, 1Н, J 8.5 Гц, Н-4′′′′), 8.18 (м, 1Н, Н-3′′′), 8.19 (м, 1Н, Н-6′′′), 8.33-8.35 (м, 1Н, Н-5′′′), 8.45 (м, 1Н, Н-4′′′). 13С-ЯМР-спектр (DMSO-d6, δС, м. д.): 27.48 (2), 46.78 (1/3), 49.28 (1/3), 53.34 (6′), 55.32 (3′′), 55.87 (OCH3), 57.06 (OCH3), 59.49 (6′′), 65.28 (4′′), 68.39 (2′′), 70.49 (5′), 70.94 (5), 70.98 (2′), 72.33 (4′), 72.58 (3′), 73.08 (5′′), 80.33 (6/4), 83.46 (4/6), 95.66 (1′), 99.28 (1′′), 103.57 (3′′′′/5′′′′), 103.79 (3′′′′/5′′′′), 106.50 (2′′′), 106.75 (7′′′), 110.78 (5′′′), 111.12 (4′′′), 117.60 (1′′′′), 119.21 (2′′′′/6′′′′), 119.30 (2′′′′/6′′′′), 129.19 (4′′′′), 139.08 (3′′′), 139.68 (6′′′), 142.32 (1′′′/8′′′), 143.00 (8′′′/1′′′), 155.65 (9′′′), 156.39 (10a′′′/4a′′′), 158.37 (9a′′′/8a′′′), 159.63 (8a′′′/9a′′′), 159.70 (4a′′′/10a′′′). Масс-спектр (МАЛДИ, m/z, СНСА): 843.67. Методика дериватизации смеси антибиотиков Смешали по 10 мкл 0.005 М растворов каждого ан тибиотика (канамицина, сисомицина, тобрамицина и паромомицина) в карбонатном буфере (pH 9.55). К полученному раствору добавили 100 мкл карбо натного буфера (pH 9.55) и 50 мкл 0.005 М раствора соли 1 в ацетонитриле. Пробы для анализа отбирали прямо из реакционной смеси. Экспериментальная оценка значения pKR+ соединения 2 [21, 22] Для оценки значения pKR+ соединения 2 был приго товлен ряд растворов в смеси H2O/ DMSO/Bu4NOH с различным содержанием DMSO при постоянной концентрации вещества. Стоковый раствор исход ного соединения добавляли непосредственно перед спектрофотометрическими измерениями. В сильно основных условиях в системе присутствуют как кар бокатион R+, так и его неионизированная форма в виде соответствующего тританола ROH, имеющие максимальное поглощение при различных длинах волн. Полученные значения оптической плотности в области максимального поглощения карбокатиона (λ = 289 нм) использовали для расчета соотношения [R+]/[ROH]. Для определения значения pKR+ были построены зависимости log([R+]/[ROH]) от функций основности H_ и С_, значения которых в каждом рас творе определяются мольным содержанием DMSO. С учетом погрешности измерений полученное значе ние pKR+ составляет 18.1 ± 0.5. Квантово-химические расчеты Структуры участников модельного механизма пре вращений рассчитывали посредством программного пакета Gaussian-09 [23] полуэмпирическим методом PM3 с полной оптимизацией геометрических параметров молекул реагентов и продуктов. Последующее вычисление частот нормальных колебаний по стандартной процедуре пакета Gaussian-09 показало, что рассчитанные структуры отвечают критериям стационарной точки (минимумы и седловые точки ППЭ). Результаты расчетов визуализировали при помощи программы ChemCraft [24]. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ С целью определения оптимальных условий функ ционализации аминов была изучена реакция гек сафторфосфата трис(2,6-диметоксифенил)метилия 1 с н-бутиламином (рис. 3). Установлено, что при избытке амина полная кон версия исходного субстрата 1 в единственный про дукт 2 завершается уже при комнатной температуре в течение 10 мин в ацетонитриле. Полнота превра щения легко контролируется обычной ОФ-ВЭЖХ, поскольку соединение 2 поглощает свет в УФ диапазоне (рис. 4). Реакция не требует каких-либо специальных условий. Структура аддукта 2 была подтверждена с по мощью 1D и 2D ЯМР-спектроскопии с полным от несением сигналов в спектрах ЯМР 1H и 13C (см. «Экспериментальную часть»). Механизм образова ния вещества 2, по-видимому, включает ипсо-атаку аминогруппы в ортоположение одного из бензольных колец с последующим элиминированием метокси группы в виде метанола и повторным нуклеофиль ным замещением во второе кольцо [21]. В сильнощелочной среде окрашенный катион 2 способен присоединять гидроксид-анион и перехо дить в бесцветный тританол. Один из параметров для оценки стабильности карбокатиона - величи на pKR+, физический смысл которой заключается в значении pH, при котором равны концентрации катионной (окрашенной) и неокрашенной формы. Для соединения 2 экспериментальная оценка дает значение pKR+ ≈ 18, что свидетельствует об ис ключительно высокой стабильности катиона: даже в слабощелочных условиях доля катионной формы составляет 100%. Квантово-химический расчет полуэмпирическим методом PM3 показывает, что для катиона 1 ха рактерна структура пропеллерного типа (рис. 5А). Рассчитанная геометрическая конфигурация ка тиона 2 (на примере Q+-Et) характеризуется ярко выраженным выведением диметоксифенильной группы в плоскость, ортогональную акридиновому фрагменту, и высокой симметрией (рис. 5Б). Также были оценены формальные заряды, кото рые составляют 0.324 на C-атоме и 0.300 на N-атоме центрального кольца акридинового фрагмента. С этим распределением зарядов совпадает и рас считанная плотность НСМО-орбитали на тех же ато мах (рис. 5В). Таким образом, положительный заряд в большей степени локализован на центральном ато ме углерода и резонансная структура 2a лучше от ражает строение веществ типа Q+-R (рис. 6). Затем была изучена дериватизация простейше го аминоуглевода, аминоглюцитола. Аминоглюцитол в свободном виде невозможно определить методом масс-спектрометрии МАЛДИ из-за небольшой мо лекулярной массы (181 Да) и затрудненной ионизу емости молекулы. Контролируя методом ТСХ исчез новение пятна исходного аминоспирта при действии на него избытка дериватизирующего агента, установ лено, что реакция проходит за 30 мин при комнатной температуре, и в спектре МАЛДИ-МС виден четкий сигнал, соответствующий ожидаемой массе конъю гата (рис. 7). Для изучения возможности аналогичной дерива тизации аминогликозидных антибиотиков мы выбра ли канамицин, сисомицин, паромомицин, тобрамицин (рис. 1). Поскольку коммерчески доступный препарат канамицина выпускается в форме сульфата канами цина, образец был растворен в карбонатном буфере (pH 9.55). Как и в случае с н-бутиламином, реакция идет практически с полной конверсией (рис. 8). Особенностью строения исследуемых аминоглико зидов является присутствие нескольких аминогрупп, и модификация может проходить по любой из них. Однако реакция протекает гладко и дает один основ ной продукт (рис. 8), который был выделен препара тивно методом ОФ-ВЭЖХ. Анализ 2D ЯМР-спектров вещества 3 показал, что дериватизация проходит се лективно по аминогруппе первичного атома углерода (см. «Экспериментальную часть»). По-видимому, это связано с более высокой стерической доступностью этой аминогруппы по сравнению с аминогруппами, непосредственно связанными с атомами углерода шестичленных циклов и экранированных соседними гидроксильными группами. Продукт дериватизации легко детектируется масс-спектрометрически: при нанесении в ячейку мишени масс-спектрометра 2 × 10-12 моль конъюга та 3 в спектре МАЛДИ-МС (рис. 9) наблюдается со ответствующий сигналу вещества отчетливый пик с высоким соотношением сигнал/шум. Стоит отме тить, что увеличение массы исследуемого вещества на 359 Да позволяет сместить сигнал в спектре в сто рону бóльших значений, что исключает перекрыва ние с сигналами матрицы. Чтобы ответить на вопрос, как дериватизация вли яет на чувствительность обнаружения канамицина в МАЛДИ-МС, был проведен эксперимент по со вместной детекции канамицина и продукта его дери ватизации. На рис. 10 представлен спектр МАЛДИ- МС эквимолярной смеси немодифицированного канамицина и соединения 3. Интенсивность пика тритил/акридиниевого про изводного настолько высокая, что превосходит интенсивность пика немодифицированного анти биотика не менее чем на два порядка, и визуально полностью нивелирует его. При увеличении соот ношения канамицин/канамицин-Q+ до 200 : 1 вид но, что интенсивности сигналов становятся одного порядка, но интенсивность пика производного 3 все равно превосходит таковую для немодифициро ванного соединения (рис. 11). Таким образом, Q+ дериватизация снижает предел обнаружения кана мицина в МАЛДИ-МС на несколько порядков. При обработке канамицина избытком соли 1 про дуктом все равно остается соединение 3: реакци онная способность остальных аминогрупп значи тельно уступает активности группы -CH2NH2. Это свойство было использовано для одновременной детекции нескольких аминогликозидных антибио тиков с помощью масс-спектрометрии. На смесь четырех антибиотиков действовали избытком соли 1 и регистрировали МАЛДИ-масс-спектр обра зующихся аддуктов (рис. 12). В полученном масс спектре видны сигналы аддуктов канамицин-Q+ (3) (m/z 843, s/n 142.8), сисомицин-Q+ (m/z 806, s/n 166.4), тобрамицин-Q+ (m/z 826, s/n 233.2) и паромомицин-Q+ (m/z 974, s/n 56.7). ЗАКЛЮЧЕНИЕ Предложенный метод дериватизации аминосодер жащих углеводов позволяет определять их с по мощью масс-спектрометрии МАЛДИ и ОФ-ВЭЖХ с УФ-детектором. Показано, что модификация идет по аминогруппе, связанной с первичным ато мом углерода. Дериватизация позволяет увели чить чувствительность масс-спектрометрической детекции аминогликозидов на несколько порядков. Преимуществами метода являются экспрессность, экспериментальная простота и доступность реагентов.

Об авторах

A. П. Топольян

Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН

Email: formanovsky@yandex.ru
Россия

M. A. Беляева

Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН

Email: formanovsky@yandex.ru
Россия

E. E. Быков

Научно-исследовательский институт по изысканию новых антибиотиков им. Г.Ф. Гаузе

Email: formanovsky@yandex.ru
Россия

П. В. Кудан

Федеральный исследовательский центр питания и биотехнологии

Email: formanovsky@yandex.ru
Россия

E. A. Рогожин

Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН; Научно-исследовательский институт по изысканию новых антибиотиков им. Г.Ф. Гаузе

Email: formanovsky@yandex.ru
Россия

Д. A. Стрижевская

Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН

Email: formanovsky@yandex.ru
Россия

O. M. Иванова

Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН

Email: formanovsky@yandex.ru
Россия

A. В. Устинов

Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН

Email: formanovsky@yandex.ru
Россия

И. В. Михура

Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН

Email: formanovsky@yandex.ru
Россия

И. A. Прохоренко

Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН; Научно-исследовательский институт по изысканию новых антибиотиков им. Г.Ф. Гаузе

Email: formanovsky@yandex.ru
Россия

В. A. Коршун

Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН; Научно-исследовательский институт по изысканию новых антибиотиков им. Г.Ф. Гаузе

Email: formanovsky@yandex.ru
Россия

A. A. Формановский

Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН

Автор, ответственный за переписку.
Email: formanovsky@yandex.ru
Россия

Список литературы

Дополнительные файлы