Иммуногенность различных форм гликопротеина S коронавируса ближневосточного респираторного синдрома

Полный текст

ВВЕДЕНИЕ Ближневосточный респираторный синдром (БВРС) - острое воспалительное заболевание орга нов дыхания, впервые был диагностирован в июне 2012 года в Саудовской Аравии. В 2013 году вирус, вызывающий БВРС, официально назвали корона вирусом ближневосточного респираторного син дрома - БВРС-КоВ [1, 2]. БВРС-КоВ представляет собой одноцепочечный РНК-вирус, принадлежащий к семейству Coronaviridae, род Betacoronavirus. БВРС-КоВ, природным резервуаром которого яв ляются одногорбые верблюды, попадают в организм человека при употреблении непастеризованного мо лока верблюдов, возможна также передача вируса аэрозольным путем [3-5]. На сегодняшний день зарегистрировано 2260 ла бораторно подтвержденных случаев инфекции БВРС-КоВ, из них 803 с летальным исходом [6, 7]. В связи с высокой смертностью (около 35%) [6], ши роким распространением резервуара инфекции, а также с отсутствием эффективных профилакти ческих и терапевтических препаратов против БВРС, специалисты ВОЗ относят БВРС-КоВ к вирусам, потенциально способным вызывать пандемии [8], для предотвращения которых необходима разработ ка вакцинного препарата. Гликопротеин S - основной протективный анти ген БВРС-КоВ, формирует тримеры на поверхно сти оболочки вируса и играет важную роль в ин тернализации вируса в клетку [9]. Гликопротеин S состоит из двух субъединиц: S1, содержащей ре цепторсвязывающий домен (RBD), и S2, опосреду ющей слияние мембран вируса и клетки [10-13]. Эти особенности делают белок S перспективной мише нью при разработке вакцин против БВРС [14-17]. Рецепторсвязывающий домен (RBD) гликопротеи на S является ключевой мишенью при разработке профилактических и терапевтических препаратов против БВРС [18-20], так как он опосредует взаимо действие между вирусной частицей БВРС-КоВ и ре цептором DPP4 на поверхности клетки. Для разработки эффективной вакцины против БВРС важно понимать, какую форму гликопротеина необходимо использовать в составе вакцины, чтобы обеспечить защиту от БВРС. Опубликованы данные об иммуногенности различных форм гликопротеина БВРС-КоВ [21-25], но вопрос о том, что предпочти тельнее выбрать для вакцины, остается открытым, поскольку панель антигенов не исследовали в одина ковых условиях. Чтобы устранить этот пробел, нами сконструированы пять рекомбинантных векторов на основе аденовируса человека серотипа 5 (rAd5), экспрессирующих различные варианты гликопроте ина S БВРС-КоВ: - полноразмерный гликопротеин S, который лока лизуется в эндоплазматическом ретикулуме (ЭПР); - два секретируемых варианта рецепторсвязы вающего домена гликопротеина S, содержащих ли дерный пептид щелочной фосфатазы (RBD и RBD, слитый с Fc IgG1 человека, для повышения стабиль ности и иммуногенности [18, 19]), - две трансмембранные (TM) формы, локализо ванные в плазматической мембране клетки - полно размерный S и RBD с TM-доменом гликопротеина G вируса везикулярного стоматита (VSV). Поскольку полноразмерный гликопротеин S локализуется в ЭПР [26], мы сконструировали вариант S-G с деле тированным сигналом локализации в ЭПР. Для доставки гликопротеина S выбрана платфор ма на основе рекомбинантных вирусных векторов rAd5, поскольку такие векторы способны осущест влять эффективную доставку трансгена во многие типы клеток [27, 28]; их геном полностью охарактери зован, они способны к росту до высоких титров [29], а также способны индуцировать мощный гумораль ный и клеточный иммунный ответ [30, 31]. В настоящей работе представлены результа ты сравнения гуморального и клеточного иммун ного ответа, индуцированного вакцинацией мышей rAd5, несущих различные формы гликопротеина S БВРС-КоВ. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ Клеточные линии Клетки HEK293 и A549 получены из Российской коллекции клеточных линий позвоночных (Россия), клетки HEK293T и Vero E6 получены из АТСС (США). Все клетки культивировали в среде DMEM, содержащей 10% фетальной бычьей сыворотки, при 37°С в 5% СО2. Получение рекомбинантных аденовирусных частиц, экспрессирующих различные варианты гликопротеина S вируса БВРС-КоВ Аминокислотные последовательности гликопротеи на S БВРС-КоВ изолятов 2015-2017 годов получены из базы данных NCBI [32]. С использованием программы Geneious® 10.2.3 на основе аминокислотных последовательностей построена консенсусная после довательность гликопротеина S. Нуклеотидные по следовательности, кодирующие различные формы гликопротеинов, были оптимизированы для экспрес сии в клеточных линиях млекопитающих и синте зированы компанией «Евроген» (Россия). Получены пять рекомбинантных плазмид pAd5-S, pAd5-S-G, pAd5-RBD, pAd5-RBD-G и pAd5-RBD-Fc. rAd5 по лучали по методике, описанной ранее [33]. Получение лентивирусных частиц, псевдотипированных гликопротеином S БВРС- КоВ (псевдовирусов) Для получения псевдовирусов клетки НЕК293Т вы севали в 15-см культуральные чашки и котранс фицировали тремя плазмидами (pCMVΔR8,2; pLV-CMV-EGFP; pCMV-MERS-CoV-S). Спустя 72 ч супернатанты собирали, фильтровали, разливали в пробирки и замораживали при -80°С. Для титрова ния псевдовируса использовали клетки Vero E6. Титр псевдовируса выражали в единицах формирования фокусов флуоресценции (FFU, fluorescent forming units). Определение экспрессии различных форм гликопротеина S вируса БВРС-КоВ методом вестерн-блотинга Клетки HEK293 высевали в 35-мм чашки Петри и инкубировали в течение ночи до 70% монослоя, по сле чего клетки обрабатывали rAd5 в количестве 100 БОЕ/клетку. rAd5-null использовали как кон трольный вирус. Экспрессию различных форм гли копротеина вируса БВРС-КоВ определяли через 24 ч методом вестерн-блотинга с использованием анти тел, специфичных к гликопротеину S (40069-RP02, Sino Biological, Китай), и антител, специфичных к IgG кролика (NA934V, GE, Великобритания). Экспрессию мембраносвязанных вариантов гликопротеина (S, S-G, RBD-G) детектировали в лизатах клеток, приготов ленных с помощью буфера Cell Culture Lysis Reagent (Promega, США). Экспрессию секретируемых вари антов гликопротеина (RBD, RBD-Fc) детектировали в среде от клеток. На лунку наносили по 10 мкл образ цов лизатов (10 мкг общего белка), образцы среды на носили в количестве 10 мкл на лунку. Лабораторные животные Все эксперименты на животных проводили в стро гом соответствии с рекомендациями Национального стандарта Российской Федерации (ГОСТ 33044-2014, «Принципы надлежащей лабораторной практики»). Шестинедельные самки мышей C57/BL6 (18-20 г) были получены из питомника Пущино (Россия). Мыши имели свободный доступ к воде и пище, раз мещались в системе содержания животных ISOcage (Tecniplast, Италия). Иммунизация и сбор образцов сывороток Мышей случайным образом распределяли по груп пам (n = 5 при анализе гуморального ответа, n = 9 при анализе клеточного ответа) и вакцинировали ре комбинантными аденовирусными частицами внутри мышечно в дозе 108 в.ч./мышь в общем объеме 0.1 мл. Сыворотки собирали через 21 день после вакцинации для исследования титров S-специфических IgG. Определение титра антител в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа (ИФА) Титр гликопротеин-специфических антител в сыво ротке крови определяли методом иммуноферментного анализа. Использовали рекомбинантные белки: глико протеин S (40069-V08B; Sino Biological) и RBD (40071- V08B1; Sino Biological). Блокирование мест неспецифического связывания проводили раствором ФСБ в 0.1% Твин 20 (ФСБ-Т), содержащем 5% обезжирен ного молока (A0830; AppliChem, Испания). Сыворотки титровали двукратным шагом в растворе ФСБ-Т с 3% обезжиренным молоком. Для детекции использова ли вторичные антитела, специфичные к IgG мыши и конъюгированные с пероксидазой хрена (для опре деления общего титра IgG - NXA931 (GE Healthcare, США); для IgG1 - ab97240 (Abcam, Великобритания); для IgG2a - ab97245 (Abcam); для IgG2b - ab97250 (Abcam); для IgG3 - ab97260 (Abcam)). Проявляли с использованием раствора тетраметилбензидина (НИИОПиК, Россия). Реакцию останавливали добав лением 1 M H2SO4, оптическую плотность измеряли при длине волны 450 нм (OD450) на планшетном спек трофотометре Multiscan FC (Thermo Fisher Scientific). Титр IgG определяли как максимальное разведение сыворотки, в котором значение OD450 сыворотки им мунизированного животного превосходит значение контрольной сыворотки более чем в 2 раза. Реакция нейтрализации псевдовирионов (PsVNA) Реакцию нейтрализации псевдовирионов (PsVNA) проводили по методике, описанной ранее [34]. Готовили разведения сывороток, инактивированных нагреванием: 1 : 10, 1 : 40, 1 : 160 и 1 : 640. Затем эти образцы смешивали с равным объемом среды DMEM, содержащим 105 FFU/мл псевдовирионов. Эту смесь инкубировали в течение 1 ч при 37°С, инокулировали на монослой клеток Vero E6 и инкубировали при 37°С в течение 42 ч. Затем подсчитывали количество фо кусов флуоресцентных клеток EGFP. Титр нейтра лизации псевдовирионов в сыворотке иммунизиро ванного животного определяли как максимальное разведение, при котором наблюдали 50% снижение количества фокусов флуоресцентных клеток EGFP по сравнению с сыворотками интактных (не вакци нированных) животных. Анализ Т-клеточного ответа (лимфопролиферативный анализ) Животных забивали на 8 день после иммунизации и отбирали селезенки, которые гомогенизировали че рез сито с диаметром пор 100 мкм в стерильном ФСБ. Спленоциты выделяли с помощью центрифугирова ния (800 g, 30 мин) на подушке раствора фиколла (1.09 г/мл, «ПанЭко», Россия). Для анализа пролиферации Т-клеток спленоциты окрашивали карбоксифлуорес цеином с использованием набора Сarboxyfluorescein succinimidyl ester (CFSE) tracer kit (Invitrogen, США) по описанной ранее методике [35]. Клетки рассевали в 96-луночные планшеты в количестве 200000 клеток на лунку в среде RPMI1640, рестимулировали реком бинантным S БВРС-КоВ (40071-V08B1; Sino Biological) в количестве 1 мкг/лунку. Через 3 дня клетки соби рали, промывали ФСБ и окрашивали антителами, специфичными к CD3, CD4 и CD8: аллофикоцианин (APC)-меченные антитела к CD3, APC-Cy7-меченные антитела к CD8 и фикоэритрин-меченные антитела к CD4 (BD Biosciences, США), и фиксировали в рас творе 1% параформальдегида. Пролиферирующие CD4+ и CD8+ Т-лимфоциты определяли в клеточной смеси с использованием проточного цитофлуориметра BD FACS Aria III (BD Biosciences). Результирующий процент пролиферирующих клеток (Х) рассчитывали по формуле Х = %st - %, где %st - процент пролифе рирующих клеток после рестимуляции спленоцитов рекомбинантным гликопротеином S вируса БВРС- КоВ, а % - процент пролиферирующих клеток без ре стимуляции (интактных клеток). Анализ продукции интерферона гамма (ИФН-гамма) Спленоциты выделяли на 15 день после вакцинации по методике, описанной выше. Клетки рассевали в 96-луночные планшеты в количестве 200000 клеток на лунку в среде RPMI1640, далее их рестимулиро вали рекомбинантным S БВРС-КоВ (40071-V08B1; Sino Biological) в количестве 1 мкг/лунку. Через 48 ч собирали надосадочную среду. Концентрацию ИФН-гамма в среде измеряли методом ИФА с по мощью коммерческого набора (mouse IFN-γ ELISA kit; Invitrogen) по протоколу фирмы-производите ля. Прирост концентрации ИФН-гамма определя ли по формуле Х = Сst /Сint, где Х - прирост кон центрации ИФН-гамма (разы), Сst - концентрация ИФН-гамма в среде от стимулированных клеток (пг/ мл), Сint - концентрация ИФН-гамма в среде от не стимулированных (интактных) клеток (пг/мл). Статистический анализ Статистический анализ выполнен с использованием программного обеспечения GraphPad 7.0 (GraphPad Software, США). При анализе данных несвязанных выборок использовали критерий Стьюдента для не зависимых образцов или критерий Манна-Уитни в зависимости от нормальности распределения дан ных. Нормальность распределения определяли с по мощью обобщенного теста Д’Агостино-Пирсона. РЕЗУЛЬТАТЫ Получение rAd5 Для определения и сравнения иммуногенности раз личных форм гликопротеина S вируса БВРС-КоВ нами получено пять rAd5: rAd5-S, rAd5-S-G, rAd5- RBD, rAd5-RBD-G и rAd5-RBD-Fc. Схемы целе вых трансгенов в геномах rAd5 показаны на рис. 1А. Экспрессию различных форм гликопротеина S БВРС-КоВ анализировали методом вестерн-блотин га (рис. 1Б). В образцах полноразмерного гликопро теина (rAd5-S и rAd5-S-G) белок S выявляли в виде двух полипептидов (рис. 1Б), причем верхняя поло са представляла собой гликозилированную форму белка S (~230-250 кДа), а нижняя (~100 кДа) - субъ единицу S1, которая образуется в результате рас щепления полноразмерного S протеазами клетки. Молекулярные массы полос превышали рассчитан ные по нуклеотидной последовательности, что сви детельствует о предполагаемом гликозилировании белка [14, 16, 36-38]. В образцах RBD (RBD, RBD-G и RBD-Fc) выявлен единственный полипептид (рис. 1Б) с массой ~25, ~30 и ~55 кДа соответственно. Масса полипептидов на основе RBD соответствовала расчетным. rAd5, экспрессирующие различные формы гликопротеина S вируса БВРС-КоВ, индуцируют формирование гуморального иммунного ответа Мышей иммунизировали препаратами rAd5-S, rAd5-S-G, rAd5-RBD, rAd5-RBD-G и rAd5-RBDFc внутримышечно однократно в дозе 108 в.ч. Через 3 недели после иммунизации собирали сыворот ки крови мышей и анализировали титры антител, специфичных к гликопротеину S и к RBD (рис. 2). В сыворотке крови мышей контрольных групп (не иммунизированные и иммунизированные rAd5-null) гликопротеин-специфические IgG не обнаружены. Наибольший титр IgG, специфичных к гликопро теину S, наблюдали в группе животных, иммуни зированных rAd5-RBD-G [геометрическое среднее титра (ГСТ): 356055; 95% доверительный интервал (ДИ): 139042-911772], наименьший - у животных, иммунизированных rAd5-RBD-Fc (ГСТ: 29407, 95% ДИ: 11455-75492) (рис. 2А). Анализ IgG, специфич ных к RBD, показал, что наиболее иммуногенными были конструкции rAd5-RBD-G (ГСТ: 89144, 95% ДИ: 60665-130994) и rAd5-RBD (ГСТ: 58831, 95% ДИ: 40024-86424), а наименее иммуногенной - rAd5-RBDFc (ГСТ: 6400, 95% ДИ: 2230-18364). Статистически значимых различий в титрах IgG, специфичных к RBD, между группами rAd5-RBD и rAd5-RBD-G не обнаружено (рис. 2Б). У мышей известно четыре изотипа IgG, которые отвечают за идентификацию и клиренс многих анти генов: IgG1, IgG2a, IgG2b и IgG3 [39]. Определение титров изотипов IgG через 3 недели после иммуниза ции показало, что у всех иммунизированных живот ных представлены все четыре изотипа IgG (рис. 3). Значения титров IgG1, IgG2a и IgG2b для каждой группы иммунизированных животных составляли: rAd5-S (ГСТ: 409600, 409600 и 89144 соответствен но), rAd5-S-G (ГСТ: 540470, 470506 и 155209 соответ ственно), rAd5-RBD (ГСТ: 540470, 713155 и 135118 соответственно) и rAd5-RBD-G (ГСТ: 356578, 713155 и 204800 соответственно). При этом не обнаружено статистически значимых различий в титрах изоти пов IgG. После вакцинации rAd5-RBD-Fc значения титров IgG1, IgG2a и IgG2b были существенно ниже, чем в других группах (ГСТ: 102400, 89144 и 12800 соответственно). Титр IgG3 не различался существен но в группах (rAd5-S, rAd5-S-G, rAd5-RBD, rAd5- RBD-G и rAd5-RBD-Fc; ГСТ: 33779, 14703, 51200, 33779 и 5572 соответственно). Таким образом, соглас но полученным данным, наибольший вклад в общий титр гликопротеин-специфических IgG вносят изо типы IgG1 и IgG2a. rAd5, экспрессирующие мембранные формы гликопротеина БВРС-КоВ, вызывают выработку нейтрализующих антител у мышей Определение титра нейтрализующих антител (в реакции нейтрализации псевдовирионов) показало, что сыворотки крови всех мышей, иммунизированных rAd5-S, rAd5-S-G и rAd5-RBD-G, содержат нейтра лизующие антитела (рис. 4) с ГСТ 1 : 121, 1 : 160 и 1 : 70 соответственно, без статистически значимой разницы в титрах (р > 0.05). В группе rAd5-RBD только у трех мышей из пяти обнаружены нейтрализующие анти тела, тогда как в группах rAd5-RBD-Fc и у интактных животных нейтрализующие антитела не обнаружены. Таким образом, результаты проведенного экспери мента показали, что только иммунизация rAd5, экс прессирующими мембранные формы гликопротеина (S, S-G, RBD-G), позволяет индуцировать выработку нейтрализующих антител. rAd5, экспрессирующие варианты S-белка БВРС-КоВ, индуцируют формирование клеточного иммунного ответа Поствакцинальный клеточный иммунный ответ оце нивали двумя методами - по количеству пролиферирующих Т-клеток и по продукции ИФН-гамма Т-клетками в ответ на рестимуляцию гликопроте ином. Повторную стимуляцию проводили с исполь зованием полноразмерного S, так как он содержит наибольшее количество эпитопов и присутствует в вирусных частицах БВРС-КоВ. Анализ пролиферации CD4+ клеток на 8-й день после вакцинации (рис. 5, слева) выявил наиболь шую лимфопролиферативную активность в группе rAd5-S (2.10%) и наименьшую - в группе rAd5-RBDFc (0.25%). Статистически значимые различия в лим фопролиферативном ответе CD4+ клеток между группами иммунизированных и интактных живот ных наблюдали в группах rAd5-S (2.10%) и rAd5-S-G (1.63%). Анализ пролиферации CD8+ клеток (рис. 5, справа) выявил наибольшую лимфопролифератив ную активность в группе rAd5-S (1.90%), наимень шую - в группе rAd5-RBD-Fc (0.35%). Статистически значимые различия в лимфопролиферативном отве те CD8+ клеток между группами иммунизированных и интактных животных наблюдали в группах rAd5-S (1.90%), rAd5-S-G (1.15%) и rAd5-RBD-G (0.55%). Исследование продукции ИФН-гамма спленоцитами после рестимуляции гликопротеином S БВРС-КоВ также показало, что наиболее выраженный клеточ ный иммунный ответ развивался у животных, им мунизированных rAd5-S и rAd5-S-G (рис. 6): при рост концентрации ИФН-гамма составил 15.12 ± 0.43 и 10.14 ± 0.97 раза относительно интактных клеток соответственно. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ В настоящее время не существует специфических профилактических и терапевтических средств про тив ближневосточного респираторного синдрома. Интенсивные исследования, направленные на раз работку вакцин против этого заболевания, ведутся в США, Германии, Корее и других странах [40, 41]. Известно несколько кандидатных вакцин на осно ве гликопротеина БВРС-КоВ: вирусные векторы на основе рекомбинантных вирусов осповакцины, аденовируса, вируса кори и др., ДНК-вакцины, ком бинированные кандидатные вакцины на основе ДНК и рекомбинантного белка, кандидатные вакцины на основе вирусоподобных частиц и рекомбинантных белков [22, 38, 41-46]. Ключевым моментом в разработке вакцины яв ляется выбор антигена. Большинство вакцин про тив БВРС основаны на использовании различных форм гликопротеина БВРС-КоВ (полноразмерный S, субъединица S1, RBD) [14-16, 18, 22, 24, 47-55] - основной мишени нейтрализующих антител. Однако вопрос о том, какую форму выбрать для по лучения эффективной вакцины, остается откры тым. Известно, что использование полноразмерного S обеспечивает защиту 100% животных от леталь ной инфекции, вызванной БВРС-КоВ [44]. Однако некоторые авторы высказывают опасения по пово ду использования полноразмерного S БВРС-КоВ в составе вакцины. Так сообщалось, что вакцина на основе полноразмерного гликопротеина корона вируса тяжелого острого респираторного синдрома (ТОРС), который, как и БВРС-КоВ, относится к роду Betacoronavirus, приводит к развитию иммунопато логии в легких, обусловленной мощным антитель ным ответом на гликопротеин ТОРС-КоВ и слабым клеточным (Th2-поляризованный иммунный ответ) [56, 57]. Модификации гликопротеина в основном были направлены на то, чтобы в антиген входил рецеп торсвязывающий домен гликопротеина. Показана иммуногенность S1-субъединицы, RBD или RBD, слитого с Fc-фрагментом IgG человека [15, 18, 19, 49, 58]. Исследования протективности препаратов на основе RBD (субъединичные вакцины) показа ли, что вакцинация RBD защищала ~80% животных от БВРС-КоВ, несмотря на высокие титры нейтра лизующих антител, способных блокировать взаимо действия между вирусом и рецептором DPP4 на по верхности клетки [42, 59]. Отсутствие 100% защиты связано, по всей видимости, с необходимостью разви тия клеточного иммунного ответа, а также блокиро вания слияния мембран вируса и клетки, опосредо ванного S2-субъединицей. Кроме того, использование субъединичных, а также инактивированных вак цин не позволяет сформировать сбалансированный Th1/Th2-ответ и часто приводит к формированию Th2-поляризованного иммунного ответа [22, 42], раз витие которого в случае БВРС может привести к им мунопатологии легких [48]. Поэтому при разработке вакцины против БВРС важно учитывать, что им мунитет, индуцированный вакциной, должен быть Th1/Th2-сбалансированным. Исследовано множество антигенов на основе гли копротеина S БВРС-КоВ; однако не проводилось прямого сравнения этих антигенов в одинаковых условиях (с использованием одинаковых платформ для доставки антигенов). В настоящей работе прове дено прямое сравнение иммуногенности пяти различ ных форм гликопротеина S БВРС-КоВ в одинаковых условиях, для доставки использовали rAd5. У жи вотных, вакцинированных rAd5, экспрессирующи ми различные формы гликопротеина S БВРС-КоВ, развивался мощный антительный (преимущественно IgG1 и IgG2a) и Т-клеточный ответ, причем каждый из вариантов rAd5 позволял сформировать сбалан сированный Th1/Th2-ответ, что является одним из ключевых моментов в разработке вакцины против БВРС. Исследование напряженности гуморального иммунного ответа показало, что мембранная форма RBD (rAd5-RBD-G) вызывает более мощный IgG ответ, чем другие исследуемые формы. Показано также, что только мембранные формы гликопротеина БВРС-КоВ (rAd5-S, rAd5-S-G и rAd5-RBD-G) сти мулировали выработку нейтрализующих антител. Исследование напряженности клеточного иммунного ответа показало, что наибольшей иммуногенностью обладают формы полноразмерного гликопротеина БВРС-КоВ (rAd5-S и rAd5-S-G). Таким образом, результаты нашей работы позво ляют предположить, что из всех изученных форм гликопротеина S БВРС-КоВ наибольший интерес для включения в вакцину представляют полнораз мерный гликопротеин S и мембранная форма RBD (RBD-G). ЗАКЛЮЧЕНИЕ В настоящей работе изучена иммуногенность пяти вариантов гликопротеина S вируса БВРС-КоВ у мы шей. Для доставки антигенов использовали платфор му на основе рекомбинантных аденовирусных векто ров rAd5. Нами показано, что: - наиболее мощный антительный ответ развивал ся при иммунизации животных мембраносвязанным RBD (rAd5-RBD-G); -только мембранные формы гликопротеина БВРС-КоВ (rAd5-S, rAd5-S-G и rAd5-RBD-G) ин дуцировали выработку нейтрализующих антител у всех вакцинированных мышей; - наиболее выраженный клеточный иммунный от вет развивался при иммунизации животных полно размерным гликопротеином (rAd5-S); - вакцинация мышей всеми разработанными век торами rAd5 позволила сформировать сбалансиро ванный Th1/Th2-ответ.

Об авторах

T. A. Ожаровская

Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи Министерства здравоохранения Российской Федерации

Email: logunov@gamaleya.org
Россия

O. В. Зубкова

Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи Министерства здравоохранения Российской Федерации

Email: logunov@gamaleya.org
Россия

И. В. Должикова

Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи Министерства здравоохранения Российской Федерации

Email: logunov@gamaleya.org
Россия

A. С. Громова

Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи Министерства здравоохранения Российской Федерации

Email: logunov@gamaleya.org
Россия

Д. M. Гроусова

Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи Министерства здравоохранения Российской Федерации

Email: logunov@gamaleya.org
Россия

A. И. Тухватулин

Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи Министерства здравоохранения Российской Федерации

Email: logunov@gamaleya.org
Россия

O. Попова

Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи Министерства здравоохранения Российской Федерации

Email: logunov@gamaleya.org
Россия

Д. В. Щебляков

Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи Министерства здравоохранения Российской Федерации

Email: logunov@gamaleya.org
Россия

Д. Н. Щербинин

Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи Министерства здравоохранения Российской Федерации

Email: logunov@gamaleya.org
Россия

A. С. Джаруллаева

Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи Министерства здравоохранения Российской Федерации

Email: logunov@gamaleya.org
Россия

A. С. Ерохова

Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи Министерства здравоохранения Российской Федерации

Email: logunov@gamaleya.org
Россия

M. M. Шмаров

Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи Министерства здравоохранения Российской Федерации

Email: logunov@gamaleya.org
Россия

С. Я. Логинова

«48 центральный научно-исследовательский институт» Министерства обороны Российской Федерации

Email: logunov@gamaleya.org
Россия

С. В. Борисевич

«48 центральный научно-исследовательский институт» Министерства обороны Российской Федерации

Email: logunov@gamaleya.org
Россия

Б. С. Народицкий

Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи Министерства здравоохранения Российской Федерации

Email: logunov@gamaleya.org
Россия

Д. Ю. Логунов

Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи Министерства здравоохранения Российской Федерации

Автор, ответственный за переписку.
Email: logunov@gamaleya.org
Россия

A. Л. Гинцбург

Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи Министерства здравоохранения Российской Федерации

Email: logunov@gamaleya.org
Россия

Список литературы

Дополнительные файлы