Acta NaturaeActa NaturaeActa Naturae2075-8251Acta Naturae Ltd2731410.32607/actanaturae.27314Research ArticlesЭкспериментальные статьиResearch ArticleA Method for the Production of Recombinant VSVs with Confirmation of Biological ActivityМетод получения рекомбинантных VSV с подтверждением биологической активностиMorozV. D.МорозВ. Д.
Russian Federation
moroz.vd@talantiuspeh.ruGasanovN. B.ГасановН. Б.
Russian Federation
gasanov.nb@talantiuspeh.ruEgorovA. D.ЕгоровА. Д.
Russian Federation
moroz.vd@talantiuspeh.ruMalogolovkinA. S.МалоголовкинА. С.
Russian Federation
moroz.vd@talantiuspeh.ruNagornykhM. O.НагорныхМ. О.
Russian Federation
moroz.vd@talantiuspeh.ruSubchevaE. N.СубчеваЕ. Н.
Russian Federation
moroz.vd@talantiuspeh.ruKolosovaE. S.КолосоваЕ. С.
Russian Federation
moroz.vd@talantiuspeh.ruFizikovaA. Yu.ФизиковаА. Ю.
Russian Federation
moroz.vd@talantiuspeh.ruIvanovR. A.ИвановР. А.
Russian Federation
moroz.vd@talantiuspeh.ruKarabelskyA. V.КарабельскийА. В.
Russian Federation
moroz.vd@talantiuspeh.ruSirius University of Science and TechnologyНаучно-технологический университет «Сириус»First Moscow State Medical University (Sechenov University)Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова Минздрава России, Сеченовский университет1005202416159660111202331012024Copyright ©; 2024, Moroz V.D., Gasanov N.B., Egorov A.D., Malogolovkin A.S., Nagornykh M.O., Subcheva E.N., Kolosova E.S., Fizikova A.Y., Ivanov R.A., Karabelsky A.V.Copyright ©; 2024, Мороз В.Д., Гасанов Н.Б., Егоров А.Д., Малоголовкин А.С., Нагорных М.О., Субчева Е.Н., Колосова Е.С., Физикова А.Ю., Иванов Р.А., Карабельский А.В.2024Moroz V.D., Gasanov N.B., Egorov A.D., Malogolovkin A.S., Nagornykh M.O., Subcheva E.N., Kolosova E.S., Fizikova A.Y., Ivanov R.A., Karabelsky A.V.Мороз В.Д., Гасанов Н.Б., Егоров А.Д., Малоголовкин А.С., Нагорных М.О., Субчева Е.Н., Колосова Е.С., Физикова А.Ю., Иванов Р.А., Карабельский А.В.https://creativecommons.org/licenses/by/4.0https://actanaturae.ru/2075-8251/article/view/27314

The design of new effective cancer treatment methods is a promising and important research field in translational medicine. Oncolytic viruses can induce immunogenic cell death by activating the body’s immune system to recognize tumor cells. This work presents the results for optimizing the production of recombinant vesicular stomatitis viruses (rVSVs). To ensure the assembly of viral particles, we developed the HEK293TN-T7 cell line, which stably expresses DNA-dependent RNA polymerase 7 for viral genome transcription, and obtained helper plasmids encoding viral genes under the control of the CAG promoter. The oncolytic activity of the purified virus preparation was assessed in a murine model of B16F10Red melanoma cells expressing a red fluorescent protein. The presented method makes it possible to obtain purified viral preparations with a high titer and oncolytic activity. The amplification of viral particles in a HEK293 suspension culture allows for rapid scalability. Therefore, the developed approach can be used to obtain other recombinant VSV-based oncolytic viruses for tumor immunotherapy.

Создание новых эффективных средств лечения опухолей является перспективным и актуальным направлением трансляционной медицины. Онколитические вирусы способны индуцировать иммуногенную клеточную смерть, активируя иммунную систему организма для распознавания злокачественной опухоли. В данной работе представлены результаты оптимизации метода получения рекомбинантных вирусов везикулярного стоматита. Для сборки вирусных частиц получена клеточная линия HEK293TN-Т7, стабильно экспрессирующая ДНК-зависимую РНК-полимеразу Т7 для экспрессии вирусного генома, а также получены хелперные плазмиды, кодирующие вирусные гены под контролем CAG-промоторов. Онколитическую активность очищенного препарата модельного вируса определяли на клетках меланомы мыши B16F10Red, экспрессирующих красный флуоресцентный белок. Предложенный метод позволяет получать очищенный вирусный препарат с высоким титром и с онколитической активностью; благодаря амплификации вирусных частиц в суспензионной культуре клеток HEK293, легко масштабируется и может в дальнейшем использоваться для получения других рекомбинантных онколитических вирусов на основе вируса везикулярного стоматита для иммунотерапии злокачественных опухолей.

oncolytic virusesvesicular stomatitis viruscancermelanomacytopathic effectrecombinant vesicular stomatitis virusVSVонколитические вирусыонкологические заболеваниямеланомарекомбинантный вирус везикулярного стоматитаМинистерство науки и высшего образования РФMinistry of Science and Higher Education of the Russian Federation075-10-2021-093Pearl T., Markert J., Cassady K., Ghonime M. // Mol. Ther. Oncolytics. 2019. V. 13. P. 14–21.Malogolovkin A., Gasanov N., Egorov A., Weener M., Ivanov R., Karabelsky A. // Viruses. 2021. V. 13. № 7. P. 1271.Geisbert T., Feldmann H. // J. Infectious Dis. 2011. V. 204. № suppl_3. P. 1075–1081. https://www.jstor.org/stable/41329906.Geisbert T., Feldmann H. // J. Infectious Dis. 2011. V. 204. № suppl_3. P. 1075–1081.Zemp F., Rajwani J., Mahoney D. // Biotechnol. Genet. Engin. Rev. 2018. V. 34. № 1. P. 122–138.Velazquez-Salinas L., Naik S., Pauszek S., Peng K., Russell S., Rodriguez L. // Hum. Gene Ther. Clin. Dev. 2017. V. 28. № 2. P. 108–115.Whitt M. // J. Virol. Methods. 2010. V. 169. № 2. P. 365–374.Decision of the Council of the Eurasian Economic Commission dated November 3, 2016 № 89 “On approval of the Rules for conducting research on biological medicinal products of the Eurasian Economic Union” (as amended by decisions of the Council of the Eurasian Economic Commission dated July 15, 2022 No. 110, dated July 4, 2023 № 77)Решение Совета Евразийской экономической комиссии от 3 ноября 2016 г. № 89 «Об утверждении Правил проведения исследований биологических лекарственных средств Евразийского экономического союза» (в ред. решений Совета Евразийской экономической комиссии от 15.07.2022 № 110, от 04.07.2023 № 77).Green M., Sambrook J. Mol. Cloning: A Laboratory Manual. 4th Edition. New York, 2012. V. 2.Kirshina A., Vasileva O., Kunyk D., Seregina K., Muslimov A., Ivanov R., Reshetnikov V. // Biomolecules. 2023. V. 13. № 11. P. 1677. doi: 10.3390/biom13111677.Laemmli U. // Nature. 1970. V. 227. № 5259. P. 680–685.Lei C., Yang J., Hu J., Sun X. // Virologica Sinica. 2021. V. 36. № 1. P. 141–144.Felt S., Grdzelishvili V. // J. Gen. Virol. 2017. V. 98. № 12. P. 2895–2911.Finkelshtein D., Werman A., Novick D., Barak S., Rubinstein M. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2013. V. 110. № 18. P. 7306–7311.Takahashi K., Yokobayashi Y. // ACS Synth. Biol. 2019. V. 8. № 9. P. 1976–1982.Dou Y., Lin Y., Wang T., Wang X., Jia Y., Zhao C. // FEBS Open Bio. 2021. V. 11. № 1. P. 95–104.Abdelmageed A., Ferran M. // Curr. Protoc. Microbiol. 2020 V. 58. № 1. e110.Abdelmageed A., Ferran M. // Curr. Protoc. Microbiol. 2020. V. 58. № 1. e110.Elahi S., Shen C., Gilbert R. // J. Biotechnol. 2019. V. 289. P. 144–149.Van der Valk J., Bieback K., Buta C., Cochrane B., Dirks W., Fu J., Hickman J., Hohensee C., Kolar R., Liebsch M. // ALTEX. 2018. V. 35. № 1. P. 99–118.Kim I., Jenni S., Stanifer M., Roth E., Whelan S., van Oijen A., Harrison S. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2017. V. 114. P. 28–36.Sakata M., Tani H., Anraku M., Kataoka M., Nagata N., Seki F., Tahara M., Otsuki N., Okamoto K., Takeda M. // Sci. Rep. 2017. V. 7. № 1. P. 11607.Moerdyk-Schauwecker M., Hwang S., Grdzelishvili V. // Virol. J. 2009. V. 6. P. 166.22.Thomas D., Newcomb W., Brown J., Wall J., Hainfeld J., Trus B., Steven A. // J. Virol. 1985. V. 54. № 2. P. 598–607.Buonocore L., Blight K., Rice C., Rose J. // J. Virol. 2002. V. 76. № 14. P. 6865–6872.Durham N., Mulgrew K., McGlinchey K., Monks N., Ji H., Herbst R., Suzich J., Hammond S., Kelly E. // Mol. Ther. 2017. V. 25. № 8. P. 1917–1932.Abdulal R., Malki J., Ghazal E., Alsaieedi A., Almahboub S., Khan M., Alsulaiman R., Ghaith M., Abujamel T., Ganash M. // Front. Mol. Biosci. 2023. V. 10. P. 1190669.Isaeva A.S., Porozova N.O., Idota E., Volodina S.I., Lukashev A.N., Malogolovkin A.S. // Sechenov Med. J. 2023. V. 14. № 4. P. 17–30.Cristi F., Gutiérrez T., Hitt M., Shmulevitz M. // Front. Mol. Biosci. 2022. V. 9. P. 831091.