Among the nonvirion proteins of the vaccinia virus (VACV), a 94-kDa long protein is most abundantly present; the protein is a truncated form of the 150-kDa A-type inclusion (ATI) protein of the cowpox virus encoded by the ati gene. This VACV protein does not form intracellular ATIs, being as it is a major immunogen upon infection/immunization of humans or animals with the VACV. Antibodies specific to this protein are not virus-neutralizing. The present study focused on the effect of the production of this nonstructural major immunogenic VACV protein on the manifestation of pathogenicity and immunogenicity of the virus in the BALB/c mouse model of infection. In order to introduce a targeted deletion into the VACV LIVP genome, the recombinant integration/deletion plasmid p∆ati was constructed and further used to generate the recombinant virus LIVP∆ati. The pathogenicity of the VACV LIVP and LIVP∆ati strains was studied in 3-week-old mice. The mice were intranasally infected with the viruses at a dose of 107 pfu; 50% of the animals infected with the parent LIVP strain died, while infection with the LIVP∆ati strain led to the death of only 20% of the mice. Intradermal vaccination of mice aged 6–7 weeks with the LIVP∆ati virus statistically significantly increased the production of VACV-specific IgG, compared to that after intradermal vaccination with VACV LIVP. Meanwhile, no differences were noted in the cell-mediated immune response to the vaccination of mice with VACV LIVP or LIVP∆ati, which was assessed by ELISpot according to the number of splenocytes producing IFN-γ in response to stimulation with virus-specific peptides. Intranasal infection of mice with lethal doses of the cowpox virus or the ectromelia virus on day 60 post-immunization with the studied VACV variants demonstrated that the mutant LIVP∆ati elicits a stronger protective response compared to the parent LIVP.
Среди невирионных белков вируса осповакцины (VACV) наиболее представлен поздний белок 94 кДа – укороченная форма белка внутриклеточных телец включения типа А (A-type inclusion, ATI) вируса оспы коров, который имеет размер 150 кДа и кодируется геном ati. Этот белок VACV не формирует внутриклеточные ATI, будучи при этом мажорным иммуногеном при инфекции/иммунизации VACV человека или животных, а антитела к этому белку не являются вируснейтрализующими. В представленной работе изучено влияние продукции неструктурного мажорного иммуногенного белка VACV на проявления патогенности и иммуногенности вируса при модельной инфекции мышей линии BALB/c. Для направленного введения делеции в геном VACV LIVP создана рекомбинантная плазмида интеграции/делеции p∆ati и с ее помощью рекомбинантный вирус LIVP∆ati. Патогенность штаммов VACV LIVP и LIVP∆ati изучали на 3-недельных мышах. Интраназальное заражение мышей вирусами в дозе 107 БОЕ приводило к гибели 50% животных, инфицированных исходным штаммом LIVP, тогда как после заражения штаммом LIVP∆ati погибло лишь 20% мышей. Внутрикожная иммунизация 6–7-недельных мышей вирусом LIVP∆ati приводила к достоверному увеличению продукции VACV-специфичных IgG по сравнению с внутрикожной вакцинацией VACV LIVP. При этом не выявлено различий в клеточном иммунном ответе на вакцинацию мышей VACV LIVP или LIVP∆ati, оцениваемом методом ELISpot по числу спленоцитов, продуцирующих IFN-γ в ответ на стимуляцию вирус-специфическими пептидами. Интраназальное заражение мышей летальными дозами вируса оспы коров или вируса эктромелии на 60-й день после иммунизации изучаемыми вариантами VACV показало, что мутантный LIVP∆ati обусловливает более выраженный протективный эффект по сравнению с родительским LIVP.