The generation of transgenic model organisms (primarily mice) is an integral part of modern fundamental and applied research. Simple techniques based on the biology of these laboratory rodents can often increase efficiency when generating genome-edited mouse strains. In this study, we share our three years of experience in the optimization of mouse genome editing based on microinjection of CRISPR/Cas9 components into ca. 10,000 zygotes. We tested a number of techniques meant to improve efficiency in generating knockout mice, such as optimization of the superovulation method and choosing the optimal mouse strains to be used as zygote donors and foster mothers. The presented results might be useful to laboratories aiming to quickly and efficiently create new mouse strains with tailored genome editing.
Редактирование генома модельных организмов, в первую очередь мышей, стало необходимым условием как для изучения функциональной роли генов, так и для разработки новых лекарственных средств. Эффективность практического применения новейших подходов геномного редактирования зачастую можно повысить с помощью простых приемов, связанных с биологическими особенностями лабораторных животных. Нами обобщен опыт, полученный в ходе трехлетней работы по микроинъекции компонентов системы CRSIPR/Cas9 в более чем 10 000 яйцеклеток. Практически проверены такие подходы к повышению эффективности создания мышей с измененным геномом, как выбор оптимальных линий животных, используемых в качестве доноров оплодотворенных яйцеклеток, а также в качестве суррогатных матерей. Проведено сравнение эффективности схем суперовуляции для получения максимального количества оплодотворенных яйцеклеток от каждой мыши. Представленные результаты будут полезны лабораториям, стремящимся к быстрому и эффективному получению новых линий мышей с заданными изменениями генома.