The hepatitis C virus (HCV) envelope proteins E1 and E2, being virion components, are involved in the formation of infectious particles in infected cells. The detailed structure of the infectious particle of HCV remains poorly understood. Moreover, the virion assembly and release of virions by the cell are the least understood processes. It is believed that virion properties depend on glycosylation of the virus envelope proteins in a cell, while glycansat several glycosylation sites of these proteins play a pivotal role in protein functioning and the HCV life cycle. N-glycans of glycoproteins can influence viral particle formation, virus binding to cell surface, and HCV pathogenesis. We studied the effect of glycans on the folding ofthe E2 glycoprotein, formation of functional glycoprotein complexes and virus particles in insect and mammalian cells. In order to investigate these processes, point mutations of the N-glycosylation sites of HCV protein E2 (genotype 1b strain 274933RU) were generated and the mutant proteins were further analyzed in the baculovirus expression system. Elimination of the single glycosylation sites of the E2 glycoprotein, except for the N6 site, did not affect its synthesis efficiency in Sf9 insect cells, while the electrophoretic mobility of mutant proteins increased in proportion to the decrease in the number of glycosylation sites. The level of synthesis of HCV glycoprotein E2 in human HEK293T cells depended on the presence of glycans at the N1 and N8 glycosylation sites in contrast to Sf9 cells. At the same time, elimination of glycans at the N1, N2, and N10 sites led to the accumulation of unproductive E1E2 dimers as aggregates and productive assembly suppression of virus-like particles both in insect and mammalian cells. In addition, elimination of single glycosylation sites of HCV E2 had no impact on the RNA synthesis of structural proteins and formation of virus-like particles in insect and mammalian cells.
Белки оболочки вируса гепатита С (ВГС) E1 и E2, являясь компонентами вириона, участвуют в формировании инфекционных частиц вируса в зараженной клетке. Детальное строение частицы ВГС остается малоизученным, причем наименее изучен процесс сборки вирионов и их выход из клетки. Предполагается, что свойства вириона зависят от гликозилирования белковой оболочки вируса в клетке, а гликаны в некоторых сайтах гликозилирования этих белков важны для их функционирования и прохождения жизненного цикла ВГС. N-гликаны гликопротеинов могут влиять на формирование вирусных частиц, связывание вируса с клеткой и патогенез гепатита С. Мы изучили влияние гликанов на сворачивание гликопротеина Е2, образование функциональных гликопротеиновых комплексов и формирование вирусных частиц в клетках насекомых и млекопитающих. С этой целью в сайты N-гликозилирования Е2 вируса гепатита С (генотип 1б штамм 274933RU) вводили точечные мутации и анализировали мутантные белки в бакуловирусной системе экспрессии. Удаление единичных сайтов гликозилирования гликопротеина Е2, за исключением сайта N6, не сказывалось на эффективности его синтеза в клетках насекомых Sf9, а электрофоретическая подвижность мутантных белков возрастала пропорционально снижению числа сайтов гликозилирования. В отличие от клеток Sf9, уровень синтеза гликопротеина Е2 ВГС в клетках Hek293T человека зависел от присутствия гликанов в сайтах гликозилирования N1 и N8. В то же время удаление гликанов в сайтах N1, N2 и N10 приводило к накоплению непродуктивных димеров Е1Е2 в виде агрегатов и подавлению продуктивной сборки вирусоподобных частиц как в клетках насекомых, так и в клетках млекопитающих. Удаление единичных сайтов гликозилирования Е2 ВГС не влияло на синтез РНК структурных белков и образование вирусоподобных частиц в клетках насекомых и млекопитающих.