Adenoviruses cause a wide variety of human infectious diseases. Adenoviral conjunctivitis and epidemic keratoconjunctivitis are commonly associated with human species D adenoviruses. Currently, there is no sufficient or appropriate treatment to counteract these adenovirus infections. Thus, there is an urgent need for new etiology-directed therapies with selective activity against human adenoviruses. To address this problem, the adenoviral early genes E1A and E2B (viral DNA polymerase) seem to be promising targets. Here, we propose an effective approach to downregulate the replication of human species D adenoviruses by means of RNA interference. We generated E1A expressing model cell lines enabling fast evaluation of the RNA interference potential. Small interfering RNAs complementary to the E1A mRNA sequences of human species D adenoviruses mediate significant suppression of the E1A expression in model cells. Furthermore, we observed a strong downregulation of replication of human adenoviruses type D8 and D37 by small hairpin RNAs complementary to the E1A or E2B mRNA sequences in primary human limbal cells. We believe that our results will contribute to the development of efficient anti-adenoviral therapy.
Аденовирусы являются причиной большого числа инфекционных заболеваний человека. Офтальмологические инфекции - аденовирусный конъюнктивит и эпидемический кератоконъюнктивит - вызывают, в основном, аденовирусы человека, относящиеся к группе D. Недостаточная эффективность современных методов лечения аденовирусной инфекции обусловливает необходимость поиска и разработки лекарственных средств, избирательно воздействующих на возбудителей данного заболевания. Потенциальными мишенями для создания терапевтических препаратов служат ранние гены аденовирусов человека, такие, как ген ДНК-полимеразы Е2В и ген Е1А, играющие важную роль в репликации вирусной ДНК. В настоящей работе предложен подход к эффективному подавлению репликации аденовирусов группы D человека с помощью РНК-интерференции. Созданы модельные линии клеток, которые позволяют быстро определять эффективность действия интерферирующих РНК, комплементарных различным участкам мРНК гена Е1А. Нами показано значительное подавление экспрессии Е1А с помощью интерференции РНК в таких клетках. Также показана высокая эффективность малых шпилечных РНК, специфичных в отношении ранних генов E1A и E2B аденовирусов группы D человека, при подавлении репликации аденовирусов типа D8 и D37 в первичных клетках лимба роговицы глаза человека. Мы надеемся, что результаты нашего исследования смогут послужить основой для разработки современных лекарственных средств для борьбы с заболеваниями человека, вызываемыми аденовирусами.