Acta NaturaeActa NaturaeActa Naturae2075-8251Acta Naturae Ltd1048510.32607/20758251-2015-7-3-74-80Research ArticlesЭкспериментальные статьиResearch ArticleThe Use of Transcription Terminators to Generate Transgenic Lines of Chinese Hamster Ovary Cells (CHO) with Stable and High Level of Reporter Gene ExpressionИспользование терминаторов транскрипции для создания трансгенных линий клеток яичников китайского хомячка (СНО) со стабильным и высоким уровнем экспрессии репортерного генаGasanovN. B.ГасановН. Б.
Russian Federation
mog@genebiology.ruToshchakovS. V.ТощаковС. В.
Russian Federation
mog@genebiology.ruGeorgievP. G.ГеоргиевП. Г.
Russian Federation
mog@genebiology.ruMaksimenkoO. G.МаксименкоO. Г.
Russian Federation
mog@genebiology.ruInstitute of Gene Biology, Russian Academy of SciencesИнститут биологии гена РАН1509201573VOL 7, NO3 (2015)ТОМ 7, №3 (2015)748017012020Copyright ©; 2015, Gasanov N.B., Toshchakov S.V., Georgiev P.G., Maksimenko O.G.Copyright ©; 2015, Гасанов Н.Б., Тощаков С.В., Георгиев П.Г., Максименко O.Г.2015Gasanov N.B., Toshchakov S.V., Georgiev P.G., Maksimenko O.G.Гасанов Н.Б., Тощаков С.В., Георгиев П.Г., Максименко O.Г.https://creativecommons.org/licenses/by/4.0https://actanaturae.ru/2075-8251/article/view/10485

Mammalian cell lines are widely used to produce recombinant proteins. Stable transgenic cell lines usually contain many insertions of the expression vector in one genomic region. Transcription through transgene can be one of the reasons for target gene repression after prolonged cultivation of cell lines. In the present work, we used the known transcription terminators from the SV40 virus, as well as the human β- and γ-globin genes, to prevent transcription through transgene. The transcription terminators were shown to increase and stabilize the expression of the EGFP reporter gene in transgenic lines of Chinese hamster ovary (CHO) cells. Hence, transcription terminators can be used to create stable mammalian cells with a high and stable level of recombinant protein production.

Клеточные линии млекопитающих широко используются для получения клеток-продуцентов рекомбинантных белков. Обычно стабильные трансгенные клеточные линии содержат много встроек экспрессионного вектора в одном месте генома. Транскрипция через трансген может быть одной из причин репрессии целевого гена при длительном культивировании таких клеточных линий. В настоящей работе с целью предотвращения транскрипции через трансген использовали известные терминаторы транскрипции вируса SV40, β- и γ-глобиновых генов человека. Показано, что терминаторы транскрипции увеличивают и стабилизируют экспрессию репортерного гена EGFP в трансгенных линиях клеток яичников китайского хомячка (СНО). Таким образом, терминаторы транскрипции могут использоваться для получения культур клеток млекопитающих с высоким и стабильным уровнем наработки целевого белка.

recombinant proteinsproduction of proteins in cell linestranscription terminationinsulatorsCHOрекомбинантные белкипродукция белков в клеточных линияхтерминация транскрипцииинсуляторыCHOThis work was supported by the Russian Science Foundation (project No. 14-24-00166).Работа выполнена при поддержке Российского научного фонда (проект № 14-24-00166).[1] Kim J.Y., Kim Y.G., Lee G.M. // Appl. Microbiol. Biotechnol. 2012, V.93, P.917-930[2] Hacker D.L., De Jesus M., Wurm F.M. // Biotech. Advances. 2009, P.1023-1027[3] Khan K.H. // Adv. Pharm. Bull. 2013, V.3, P.257-263[4] Browne S.M., Al-Rubeai M. // Trends Biotech. 2007, V.25, P.425-432[5] Lai T., Yang Y., Ng S.K. // Pharmaceuticals (Basel). 2013, V.6, P.579-603[6] Kim J.M., Kim J.S., Park D.H., Kang H.S., Yoon J., Baek K., Yoon Y. // J. Biotech. 2004, V.107, P.95-105[7] Girod P.A., Zahn-Zabal M., Mermod N. // Biotech. Bioeng. 2005, V.91, P.1-11[8] Harraghy N., Gaussin A., Mermod N. // Current Gene Therapy 2008, V.8, P.353-366[9] Recillas-Targa F., Valadez-Graham V., Farrell C.M. // BioEssays. 2004, V.26, P.796-807[10] Kwaks T.H., Otte A.P. // Trends Biotechnol. 2006, V.24, P.137-142[11] Maksimenko O.G., Deykin A.V., Khodarovich Y.M., Georgiev P.G. // Acta Naturae. 2013, V.5, №1(16), P.33-46[12] Palazzoli F., Bire S., Bigot Y., Bonnin-Rouleux F. // Nat. Biotechnol. 2011, V.29, P.593-597[13] Antoniou M., Harland L., Mustoe T., Williams S., Holdstock J., Yague E., Mulcahy T., Griffiths M., Edwards S., Ioannou P.A. // Genomics. 2003, V.82, P.269-279[14] Kwaks T.H.J., Barnett P., Hemrika W., Siersma T., Sewalt R.G., Satijn D.P., Brons J.F., van Blokland R., Kwakman P., Kruckeberg A.L. // Nat. Biotechnol. 2003, V.21, P.553-558[15] Saxena A., Carninci P. // BioEssays. 2011, V.33, P.830-839[16] Martianov I., Ramadass A., Barros A.S., Chow N., Akoulitchev A. // Nature 2007, V.445, P.666-670[17] Erokhin M., Davydova A., Parshikov A., Studitsky V.M., Georgiev P., Chetverina D. // Epigenetics Chromatin. 2013, V.6, P.31[18] Khalil A.M., Guttman M., Huarte M., Garber M., Raj A., Rivea M.D., Thomas K., Presser A., Bernstein B.E., van Oudenaarden A. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2009, V.106, P.11667-11672[19] Silicheva M., Golovnin A., Pomerantseva E., Parshikov A., Georgiev P., Maksimenko O. // Nucleic Acids Res. 2010, V.38, P.39-47[20] Nojima T., Dienstbier M., Murphy S., Proudfoot N.J., Dye M.J. // Cell Rep. 2013, V.25, P.1080-1092[21] Plant K.E., Dye M.J., Lafaille C., Proudfoot N.J. // Mol. Cell. Biol. 2005, V.25, P.3276-3285[22] Hanawa H., Yamamoto M., Zhao H., Shimada T., Persons D.A. // Mol. Therapy. 2009, V.17, P.667-674