Acta NaturaeActa NaturaeActa Naturae2075-8251Acta Naturae Ltd1037210.32607/20758251-2017-9-4-84-91Research ArticlesЭкспериментальные статьиResearch ArticleRecombinant Antibodies to the Ebola Virus GlycoproteinРекомбинантные антитела к гликопротеину вируса ЭболаPaninaA. A.ПанинаA. A.
Russian Federation
paniann07@yandex.ruDementievaI. G.ДементьеваИ. Г.
Russian Federation
paniann07@yandex.ruAlievT. K.АлиевT. K.
Russian Federation
paniann07@yandex.ruToporovaV. A.ТопороваВ. А.
Russian Federation
paniann07@yandex.ruBalabashinD. S.БалабашинД. С.
Russian Federation
paniann07@yandex.ruBokovM. N.БоковM. Н.
Russian Federation
paniann07@yandex.ruPozdnyakovaL. P.ПоздняковаЛ. П.
Russian Federation
paniann07@yandex.ruShchemchukovaO. B.ШемчуковаO. Б.
Russian Federation
paniann07@yandex.ruDolgikhD. A.ДолгихД. A.
Russian Federation
paniann07@yandex.ruSveshnikovP. G.СвешниковП. Г.
Russian Federation
paniann07@yandex.ruKirpichnikovM. P.КирпичниковM. П.
Russian Federation
paniann07@yandex.ruShemyakin-Ovchinnikov Institute of Bioorganic ChemistryИнститут биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАНRussian Scientific Center for Molecular Diagnosis and TreatmentВсероссийский научный центр молекулярной диагностики и леченияLomonosov Moscow State UniversityМосковский государственный университет им. М.В. ЛомоносоваМосковский государственный университет им. М.В. ЛомоносоваRussian Scientific Center for Molecular Diagnosis and TreatmentLomonosov Moscow State UniversityВсероссийский научный центр молекулярной диагностики и лечения1512201794VOL 9, NO4 (2017)ТОМ 9, №4 (2017)849117012020Copyright ©; 2017, Panina A.A., Dementieva I.G., Aliev T.K., Toporova V.A., Balabashin D.S., Bokov M.N., Pozdnyakova L.P., Shchemchukova O.B., Dolgikh D.A., Sveshnikov P.G., Kirpichnikov M.P.Copyright ©; 2017, Панина A.A., Дементьева И.Г., Алиев T.K., Топорова В.А., Балабашин Д.С., Боков M.Н., Позднякова Л.П., Шемчукова O.Б., Долгих Д.A., Свешников П.Г., Кирпичников M.П.2017Panina A.A., Dementieva I.G., Aliev T.K., Toporova V.A., Balabashin D.S., Bokov M.N., Pozdnyakova L.P., Shchemchukova O.B., Dolgikh D.A., Sveshnikov P.G., Kirpichnikov M.P.Панина A.A., Дементьева И.Г., Алиев T.K., Топорова В.А., Балабашин Д.С., Боков M.Н., Позднякова Л.П., Шемчукова O.Б., Долгих Д.A., Свешников П.Г., Кирпичников M.П.https://creativecommons.org/licenses/by/4.0https://actanaturae.ru/2075-8251/article/view/10372

Currently, there are no approved therapies for targeted prevention and treatment of Ebola hemorrhagic fever. In the present work, we describe the development of a eukaryotic expression system for the production of three full-length chimeric antibodies (IgG1-kappa isotypes) GPE118, GPE325, and GPE534 to the recombinant glycoprotein of the Ebola virus (EBOV GP), which is a key factor in the pathogenicity of the disease. The immunochemical properties of the obtained antibodies were studied by immunoblotting and indirect, direct, and competitive ELISA using the recombinant EBOV proteins rGPdTM, NP, and VP40. The authenticity of the antibodies and the absence of cross-specificity with respect to the structural proteins NP and VP40 of the Ebola virus were proved. The epitope specificity of the resulting recombinant antibodies was studied using commercial neutralizing antibodies against the viral glycoprotein. The recombinant antibodies GPE118, GPE325, and GPE534 were shown to recognize glycoprotein epitopes that coincide or overlap with the epitopes of three well-studied neutralizing anti-Ebola virus antibodies.

В настоящее время не существует лицензированных препаратов для адресной профилактики и лечения геморрагической лихорадки Эбола. В представленной работе создана эукариотическая система экспрессии для получения трех полноразмерных химерных антител IgG1-каппа изотипа GPE118, GPE325 и GPE534 к рекомбинантному гликопротеину вируса Эбола (GP EBOV), ключевому фактору патогенности этого вируса. Иммунохимические свойства химерных антител изучены методами иммуноблотинга, непрямого, прямого и конкурентного иммуноферментного анализа с использованием рекомбинантных белков rGPdTM, NP и VP40 вируса Эбола. Доказана подлинность полученных антител и отсутствие перекрестной специфичности по отношению к структурным белкам NP и VP40 вируса Эбола. Эпитопная специфичность рекомбинантных антител исследована с использованием коммерческих нейтрализующих антител к вирусному гликопротеину. Показано, что рекомбинантные антитела GPE118, GPE325 и GPE534 узнают эпитопы гликопротеина, совпадающие или перекрывающиеся с эпитопами трех хорошо изученных нейтрализующих антител против вируса Эбола.

Ebola hemorrhagic fever virustherapeutic recombinant chimeric antibodiesвирус геморрагической лихорадки Эболатерапевтические рекомбинантные химерные антителаThis work was financially supported by the subsidy (Agreement no. 14.607.21.0096) of the Ministry of Education and Science of the Russian Federation under the Federal Targeted Program for Research and Development in Priority Areas of Advancement of the Russian Scientific and Technological Complex for 2014–2020 (unique project identifier RFMEFI60714X0096).Работа выполнена с использованием средств субсидии (соглашение № 14.607.21.0096), выделяемой Министерством образования и науки Российской Федерации в рамках реализации федеральной целевой программы «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 2014–2020 годы» (уникальный идентификатор проекта – RFMEFI60714X0096).[1] Geisbert T.W., Young H.A., Jahrling P.B., Davis K.J., Kagan E., Hensley L.E. // J. Infect. Dis. 2003, V.188, №11, P.1618-1629[2] Warren T.K., Warfield K.L., Wells J., Swenson D.L., Donner K.S., van Tongeren S.A., Garza N.L., Dong L., Mourich D.V., Crumley S. // Nat. Med. 2010, V.16, №9, P.991-994[3] Oswald W.B., Geisbert T.W., Davis K.J., Geisbert J.B., Sullivan N.J., Jahrling P.B., Parren P.W., Burton D.R. // PLoS Pathog. 2007, V.3, №1, e9[4] Olinger G.G. Jr., Pettitt J., Do Kim., Working C., Bohorov O., Bratcher B., Hiatt E., Hume S., Johnson A., Morton J. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2012, V.109, №44, P.18030-18035[5] Corti D., Misasi J., Mulangu S., Stanley D.A., Kanekiyo M., Wollen S., Ploquin A., Doria-Rose N.A., Staupe R.P., Bailey M. // Science. 2016, V.351, №6279, P.1339-1342[6] Qiu X., Wong G., Audet J., Bello A., Fernando L., Alimonti J.B., Fausther-Bovendo H., Wei H., Aviles J., Hiatt E. // Nature 2014, V.514, №7520, P.47-53[7] Davey R.T. Jr., Dodd L., Proschan M.A., Neaton J., Neuhaus Nordwall J., Koopmeiners J.S., Beigel J., Tierney J., Lane H.C., Fauci A.S. // N. Engl. J. Med. 2016, V.375, №15, P.1448-1456[8] Panina A.A., Aliev T.K., Shchemchukova O.B., Dementieva I.G., Varlamov N.E., Pozdnyakova L.P., Bokov M.N., Dolgikh D.A., Sveshnikov P.G., Kirpichnikov M.P. // Dokl Biochem Biophys. 2016, V.467, №1, P.117-120[9] Shchemchukova O.B., Dementieva I.G., Varlamov N.E., Pozdnyakova L.P., Bokov M.N., Aliev T.K., Panina A.A., Dolgikh D.A., Kirpichnikov M.P., Sveshnikov P.G. // Moscow University Biological Sciences Bulletin. 2016, V.71, №1, P.24-28[10] Balabashin D.S., Aliev T.K., Toporova V.A., Panina A.A., Dolgikh D.A., Kirpichnikov M.P. // Patent RF № 2555533.[11] Friguet B., Chaffotte A.F., Djavadi-Ohaniance L., Goldberg M.E. // J. Immunol. Meth. 1985, V.77, №2, P.305-319[12] Lee J.E., Fusco M.L., Hessell A.J., Oswald W.B., Burton D.R., Saphire E.O. // Nature 2008, V.454, P.177-182[13] Panina A.A., Dementieva I.G., Aliev T.K., Toporova V.A., Bokov M.N., Pozdnyakova L.P., Shchemchukova O.B., Dolgikh D.A., Sveshnikov P.G., Kirpichnikov M.P. // Bioorg Khim. 2017, V.43, №4, P.398-401