Acta NaturaeActa NaturaeActa Naturae2075-8251Acta Naturae Ltd1031510.32607/20758251-2018-10-4-63-69ForumФорумResearch ArticleAssessment of the Parameters of Adaptive Cell-Mediated Immunity in Naïve Common Marmosets (Callithrix jacchus)Определение параметров адаптивного клеточного иммунитета у обыкновенных мармозет (Callithrix jacchus)GordeychukI. V.ГордейчукИ. В.
Russian Federation
lab.gord@gmail.comTukhvatulinA. I.ТухватулинA. И.
Russian Federation
lab.gord@gmail.comPetkovS. P.ПетковС. П.
Sweden
lab.gord@gmail.comAbakumovM. A.АбакумовM. A.
Russian Federation
lab.gord@gmail.comGulyaevS. A.ГуляевС. A.
Russian Federation
lab.gord@gmail.comTukhvatulinaN. M.ТухватулинаН. M.
Russian Federation
lab.gord@gmail.comGulyaevaT. V.ГуляеваT. В.
Russian Federation
lab.gord@gmail.comMikhaylovM. I.МихайловM. И.
Russian Federation
lab.gord@gmail.comLogunovD. Y.ЛогуновД. Ю.
Russian Federation
lab.gord@gmail.comIsaguliantsM. G.ИсагулянцM. Г.
Russian Federation
lab.gord@gmail.comChumakov Federal Scientific Center for Research and Development of Immune-and-Biological Products of Russian Academy of SciencesФедеральный научный центр исследований и разработки иммунобиологических препаратов им. М.П. Чумакова РАНN.F. Gamaleya National Research Center for Epidemiology and MicrobiologyНациональный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почётного академика Н.Ф. Гамалеи Министерства здравоохранения Российской ФедерацииSechenov First Moscow State Medical UniversityПервый Московский государственный медицинский университет им И.М. Сеченова Минздрава РоссииKarolinska InstituteКаролинский институтPirogov Russian National Research Medical UniversityРоссийский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова Минздрава РоссииNational University of Science and Technology MISiSНациональный исследовательский технологический университет МИСиС (МИСиС)Russian Medical Academy of Continuous Professional EducationРоссийская медицинская академия непрерывного профессионального образованияMechnikov Research Institute for Vaccines and SeraНаучно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. МечниковаRīga Stradiņš UniversityРижский университет им. Страдыня15122018104VOL 10, NO4 (2018)ТОМ 10, №4 (2018)636917012020Copyright ©; 2018, Gordeychuk I.V., Tukhvatulin A.I., Petkov S.P., Abakumov M.A., Gulyaev S.A., Tukhvatulina N.M., Gulyaeva T.V., Mikhaylov M.I., Logunov D.Y., Isaguliants M.G.Copyright ©; 2018, Гордейчук И.В., Тухватулин A.И., Петков С.П., Абакумов M.A., Гуляев С.A., Тухватулина Н.M., Гуляева T.В., Михайлов M.И., Логунов Д.Ю., Исагулянц M.Г.2018Gordeychuk I.V., Tukhvatulin A.I., Petkov S.P., Abakumov M.A., Gulyaev S.A., Tukhvatulina N.M., Gulyaeva T.V., Mikhaylov M.I., Logunov D.Y., Isaguliants M.G.Гордейчук И.В., Тухватулин A.И., Петков С.П., Абакумов M.A., Гуляев С.A., Тухватулина Н.M., Гуляева T.В., Михайлов M.И., Логунов Д.Ю., Исагулянц M.Г.https://creativecommons.org/licenses/by/4.0https://actanaturae.ru/2075-8251/article/view/10315

Common marmosets are small New World primates that have been increasingly used in biomedical research. This report presents efficient protocols for assessment of the parameters of adaptive cell-mediated immunity in common marmosets, including the major subpopulations of lymphocytes and main markers of T- and B-cell maturation and activation using flow cytometry with a multicolor panel of fluorescently labelled antibodies. Blood samples from eight common marmosets were stained with fluorescently labeled monoclonal antibodies against their population markers (CD45, CD3, CD20, CD4, CD8) and lymphocyte maturation and activation markers (CD69, CD62L, CD45RO, CD107a and CD27) and analyzed by flow cytometry. Within the CD45+ population, 22.7±5.5% cells were CD3- CD20+ and 67.6±6.3% were CD3+CD20-. The CD3+ subpopulation included 55.7±5.5% CD3+CD4+CD8- and 34.3±3.7% CD3+CD4-CD8+ cells. Activation and maturation markers were expressed in the following lymphocyte proportions: CD62L on 54.0±10.7% of CD3+CD4+ cells and 74.4±12.1% of CD3+CD8+ cells; CD69 on 2.7±1.2% of CD3+CD4+ cells and 1.2±0.5% of CD3+CD8+ cells; CD45RO on 1.6±0.6% of CD3+CD4+ cells and 1.8±0.7% of CD3+CD8+ cells; CD107a on 0.7±0.5% of CD3+CD4+ cells and 0.5±0.3% of CD3+CD8+ cells; CD27 on 94.6±2.1% of CD3+ cells and 8.9±3.9% CD20+ cells. Female and male subjects differed in the percentage of CD3+CD4+CD45RO+ cells (1.9±0.5 in females vs 1.1±0.2 in males; p < 0.05). The percentage of CD20+CD27+ cells was found to highly correlate with animals’ age (r = 0.923, p < 0.005). The basal parameters of adaptive cell-mediated immunity in naïve healthy marmosets without markers of systemic immune activation were obtained. These parameters and the described procedures are crucial in documenting the changes induced in common marmosets by prophylactic and therapeutic immune interventions.

Обыкновенные мармозеты (Callithrix jacchus) - игрунковые обезьяны Нового Света, широко используются в биомедицинских исследованиях. Нами представлены оптимизированные протоколы оценки параметров адаптивного клеточного иммунитета мармозет, включая оценку субпопуляционного состава лимфоцитов и определение основных маркеров созревания и активации Т- и В-клеток методом проточной цитометрии с использованием панели флуоресцентно меченных антител. Образцы цельной крови восьми мармозет окрашивали флуоресцентно меченными моноклональными антителами к популяционным маркерам (CD45, CD3, CD20, CD4, CD8) и маркерам созревания и активации лимфоцитов (CD69, CD62L, CD45RO, CD107a и CD27) и анализировали методом проточной цитометрии. Популяция CD45+ клеток включала 22.7 ± 5.5% CD3-CD20+ клеток и 67.6 ± 6.3% CD3+CD20-клеток. Популяция CD3+ клеток состояла из 55.7 ± 5.5% CD3+CD4+CD8- и 34.3 ± 3.7% CD3+CD4-CD8+. Маркеры активации и созревания лимфоцитов выявлены в соответствующих популяциях в следующих пропорциях: CD62L на 54.0 ± 10.7% CD3+CD4+ и 74.4 ± 12.1% CD3+CD8+ клеток; CD69 на 2.7 ± 1.2% CD3+CD4+ и 1.2 ± 0.5% CD3+CD8+ клеток; CD45RO на 1.6 ± 0.6% CD3+CD4+ и 1.8 ± 0.7% CD3+CD8+ клеток; CD107a на 0.7 ± 0.5% CD3+CD4+ и 0.5 ± 0.3% CD3+CD8+ клеток; CD27 на 94.6 ± 2.1% CD3+ и 8.9 ± 3.9% CD20+ клеток. Доля CD3+CD4+CD45RO+ клеток у самок и самцов значимо различалась (1.9 ± 0.5% у самок и 1.1 ± 0.2% у самцов; p < 0.05). Доля CD20+CD27+ клеток значимо коррелировала с возрастом животных (r = 0.923, p <0.005). Определены базовые параметры адаптивного клеточного иммунитета, характерные для интактных мармозет, не имеющих маркеров системной иммунной активации. Знание этих параметров и проведение описанных процедур необходимы для оценки изменений иммунного статуса мармозет под воздействием профилактических и терапевтических иммунобиологических препаратов.

adaptive cell-mediated immunitycommon marmosetflow cytometryCallithrix jacchusадаптивный клеточный ответобыкновенные мармозетыпроточная цитометрияCallithrix jacchus.The study of the immune status of marmozet is supported by the Russian Science Foundation, grant No. 15-15-30039. Maintaining a colony of marmoset monkeys was funded from state assignment No. 209 of the Chumakov Federal Scientific Center for Research and Development of Immune-and-Biological Products of Russian Academy of Sciences. Training for non-human primates and associated mobility costs were covered by grants from the Swedish Institute TP 09272/2013 and PI 19806_2016 (INNOVIMMUNE). Participation in the work of Stefan Petkov was supported by EU Horizon2020 grant, project VACTRAIN No. 692293.Исследование иммунного статуса мармозет поддержано грантом РНФ № 15-15-30039. Поддержание колонии игрунковых обезьян финансировалось из средств Государственного задания по теме № 209 ФГБНУ «ФНЦИРИП им. М.П. Чумакова РАН». Обучение персонала работе с нечеловекообразными приматами и сопутствующие расходы на мобильность покрывались грантами Шведского института TP 09272/2013 и PI 19806_2016 (INNOVIMMUNE). Участие в работе Стефана Петкова поддержано грантом EU Horizon2020 проект VACTRAIN № 692293.[1] Moi M.L., Ami Y., Muhammad Azami N.A., Shirai K., Yoksan S., Suzaki Y., Kitaura K., Lim C.K., Saijo M., Suzuki R. // J. Gen. Virol. 2017, V.98, №12, P.2955-2967[2] Orsi A., Rees D., Andreini I., Venturella S., Cinelli S., Oberto G. // Regul. Toxicol. Pharmacol. 2011, V.59, №1, P.19-27[3] Carrion R., Patterson J.L. // Curr. Opin. Virol. 2012, V.2, №3, P.357-362[4] Arrand J.R. // Immunotherapy and vaccination against Epstein-Barr virus-associated cancer // Cancer vaccines. Eds Stern P., Carroll M., Beverley P. Cambridge: Cambridge Univ. Press, 2000. 2000, P.174-194[5] Abbott D.H., Barnett D.K., Colman R.J., Yamamoto M.E., Schultz-Darken N.J. // Comp. Med. 2003, V.53, №4, P.339-350[6] Cadavid L.F., Shufflebotham C., Ruiz F.J., Yeager M., Hughes A.L., Watkins D.I. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1997, V.94, №26, P.14536-14541[7] van der Wiel M.K., Otting N., de Groot N.G., Doxiadis G.G.M., Bontrop R.E. // Immunogenetics. 2013, V.65, №12, P.841-849[8] Antunes S.G., de Groot N.G., Brok H., Doxiadis G., Menezes A.A., Otting N., Bontrop R.E. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1998, V.95, №20, P.11745-11750[9] Gough A.W., Barsoum N.J., Gracon S.I., Mitchell L., Sturgess J.M. // Lab. Anim. Sci. 1982, V.32, №1, P.87-90[10] Mätz-Rensing K., Jentsch K.D., Rensing S., Langenhuyzen S., Verschoor E., Niphuis H., Kaup F.J. // Vet. Pathol. 2003, V.40, №4, P.405-411[11] Moi M.L., Takasaki T., Omatsu T., Nakamura S., Katakai Y., Ami Y., Suzaki Y., Saijo M., Akari H., Kurane I. // J. Gen. Virol. 2014, V.95, №3, P.591-600[12] McIntosh G.H., Giesecke R., Wilson D.F., Goss A.N. // Vet. Pathol. 1985, V.22, №1, P.86-88[13] Haworth R., Jones S., Sanchez-Morgado J., Pilling A. // Vet. Rec. 2003, V.153, №11, P.332-333[14] Zöller M., Mätz-Rensing K., Fahrion A., Kaup F.J. // Vet. Pathol. 2008, V.45, №1, P.80-84[15] Miller A.D., Kramer J.A., Lin K.C., Knight H., Martinot A., Mansfield K.G. // Vet. Pathol. 2010, V.47, №5, P.969-976[16] Laufs R., Steinke H., Gisela S., Petzold D. // J. Natl. Cancer Inst. 1974, V.53, №1, P.195-199[17] Wolfe L.G., Deinhardt F. // Primates Med. 1978, V.10, №1, P.96-118[18] Wright J., Falk L.A., Wolfe L.G., Ogden J., Deinhardt F. // J. Natl. Cancer Inst. 1977, V.59, №5, P.1475-1478[19] Neubert R., Foerster M., Nogueira A.C., Helge H. // Life Sci. 1995, V.58, №4, P.317-324[20] Brok H.P.M., Hornby R.J., Griffiths G.D., Scott L.A.M., Hart B.A. // Cytometry. 2001, V.45, №4, P.294-303[21] Neumann B., Shi T., Gan L.L., Klippert A., Daskalaki M., Stolte-Leeb N., Stahl-Hennig C. // J. Med. Primatol. 2016, V.45, №3, P.139-146[22] Nelson M., Loveday M. // J. Immunol. Res. 2014, V.913632, P.1-8[23] Reichert T., DeBruyère M., Deneys V., Tötterman T., Lydyard P., Yuksel F., Chapel H., Jewell D., Van Hove L., Linden J. // Clin. Immunol. Immunopathol. 1991, V.60, №2, P.190-208[24] Chng W.J., Tan G.B., Kuperan P. // Clin. Diagn. Lab. Immunol. 2004, V.11, №1, P.168-173[25] Yoshida T., Omatsu T., Saito A., Katakai Y., Iwasaki Y., Kurosawa T., Hamano M., Higashino A., Nakamura S., Takasaki T. // Arch. Virol. 2013, V.158, №6, P.1209-1220[26] Klinger A., Gebert A., Bieber K., Kalies K., Ager A., Bell E.B., Westermann J. // Int. Immunol. 2009, V.21, №4, P.443-455[27] Galkina E., Tanousis K., Preece G., Tolaini M., Kioussis D., Florey O., Haskard D.O., Tedder T.F., Ager A. // J. Exp. Med. 2003, V.198, №9, P.1323-1335[28] Das A., Xu H., Wang X., Yau C.L., Veazey R.S., Pahar B. // PLoS One. 2011, V.6, №1, e16524[29] Sengstake S., Boneberg E.M., Illges H. // Int. Immunol. 2006, V.18, №7, P.1171-1178