На основе pET-40b сконструирована плазмида, определяющая синтез рекомбинантной α-N-ацетилгалактозаминидазы морской бактерии Arenibacter latericius KMM 426Т (α-AlNaGal) в клетках Escherichia coli. В условиях экспрессии при температуре 16оС, концентрации индуктора 0.2 мМ и культивирования в течение 12 ч выход α-AlNaGal достигает 10 мг/л с общей активностью 49.7 ± 1.3 U. Разработаны процедуры очистки α-AlNaGal с использованием анионообменной, металлоаффинной хроматографии и гель-фильтрации. α-AlNaGal представляет собой гомодимер с молекулярной массой 164 кДа, стабильна до 50°С с температурным оптимумом реакции при 20-37°С, и ее активность не зависит от присутствия ионов металлов в инкубационной среде. Методом Н-ЯМР-спектроскопии показано, что α-AlNaGal катализирует гидролиз О-гликозидной связи с сохранением стереохимической конфигурации аномерного атома и реализует механизм, характерный для семейства 109 гликозидгидролаз. α-AlNaGal снижает серологическую активность А-эритроцитов при рН 7.3, что делает ее в перспективе пригодной для конверсии А- и АВ- эритроцитов в эритроциты группы крови О.
Vallée F., Karaveg K., Herscovics A., Moremen K.W., Howell P.L. // J. Biol. Chem. 2000, V.275, №52, P.41287-41298
Keulemans J.L.M., Reuser A.J.J., Kroos M.A., Willemsen R., Hermans M.M.P., van den Ouweland A.M.W., de Jong J.G.N., Wevers R.A., Renier W.O., Schindler D. // J. Med. Genet. 1996, V.33, №6, P.458-464
Olsson M.L., Hill C.A., de la ega H., Liu Q.P., Stroud M.R., Valdinocci J., Moon S., Clausen H., Kruskall M.S. // Transfus. Clin. Biol. 2004, V.11, №1, P.33-39
Hata J., Dhar M., Mitra M., Harmata M., Haibach P., Sun P., Smith D. // Biochem. Int. 1992, V.28, №1, P.77-86
Hsieh H.Y., Smith D. // Biotechnol. Appl. Biochem. 2003, V.37, №2, P.157-163
Отправить статью по E-mail 
