Созревание рибосомных РНК (рРНК) представляет собой сложный процесс, в ходе которого отдельные нуклеотиды подвергаются химическим модификациям по азотистым основаниям или остатку рибозы. Одна из самых распространенных модификаций рРНК - 2’-O-метилирование нуклеотидов - осуществляется рибонуклеопротеидными комплексами, содержащими в своем составе малые ядрышковые C/D-бокс-РНК. Поскольку большая часть 2’-O-метилированных нуклеотидов расположена в наиболее консервативных участках рРНК, формирующих важнейшие функциональные центры рибосом, то изменения в профиле 2’-O-метилирования могут приводить к нарушениию сборки и функционирования рибосом. Один из основных методов выявления положений 2’-O-метилированных нуклеотидов в протяженных РНК - метод терминации обратной транскрипции. В настоящей работе этот метод адаптирован к использованию флуоресцентно меченных праймеров и анализу продуктов терминации капиллярным гель-электрофорезом на автоматическом генном анализаторе. С помощью разработанного подхода проанализировано действие синтетических аналогов C/D-бокс-РНК на посттранскрипционные модификации 28S рРНК человека в клетках линии MCF-7. Установлено, что трансфекция клеток MCF-7 аналогом C/D-бокс-РНК приводит к увеличению глубины модификации отдельных сайтов 2’-O-метилирования в рРНК-мишени. Наблюдаемый эффект воздействия синтетических РНК на 2’-O-метилирование нуклеотидов рРНК в клетках человека указывает на возможность направленной регуляции посттранскрипционного созревания рРНК. Представленный подход может найти применение в разработке методов выявления заболеваний человека.
Liu B., Fournier M.J. // RNA. 2004, V.10, №7, P.1130-1141
Graifer D., Molotkov M., Styazhkina V., Demeshkina N., Bulygin K., Eremina A., Ivanov A., Laletina E., Venyaminova A., Karpova G. // Nucleic Acids Research 2004, V.32, №11, P.3282-3293
Bulygin K., Malygin A., Hountondji C., Graifer D., Karpova G. // Biochimie. 2013, V.95, №2, P.195-203
Отправить статью по E-mail 
